壬基酚对成年雌性sd大鼠生殖功能的影响

壬基酚对成年雌性sd大鼠生殖功能的影响

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1、壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响【摘要】目的:观察壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响。方法:对成年雌性SD大鼠每天灌胃壬基酚(50、100、200mg·kg-1),阳性对照组每天灌胃乙菧酚(0.2mg·kg-1),阴性对照组管饲花生油。通过阴道涂片观察性周期的变化,28d后处死大鼠,放免法测定血清雌激素、黄体生成素浓度,并作垂体、子宫、卵巢组织病理学检查,免疫组化技术检测子宫的雌激素受体(ER)表达情况。结果:壬基酚剂量≥100mg·kg-1可使大鼠出现持续动情期,血清雌激素、黄体生成素水平降低(P<0.05),卵巢组织病理学切片显示卵泡数目减少(P<0

2、.05),子宫ER表达无明显差异。结论:壬基酚在较高浓度时可抑制雌性大鼠的生殖功能。【关键词】壬基酚生殖功能大鼠SpragueDag·kg-1分为低、中、高剂量组,阴性对照组为管饲花生油,阳性对照组为乙菧酚0.2mg·kg-1。饲养28d,每天阴道涂片,观察动情周期,在动情期(阴道涂片示大量无核角化细胞)处死大鼠。10%水合氯醛(每100g质量0.3ml)腹腔注射麻醉,眶后静脉丛采血,取血清置-70℃冰箱待用。按液体灌注固定方法,分离出垂体、子宫、卵巢,继续固定、脱水、透明,浸蜡包埋,制成4μm厚的石蜡切片。1.4E2、LH测定方法按试剂盒操作说明,采用放射免疫

3、法测定上述待用血清中的E2、LH水平。1.5组织形态学观察及卵泡计数上述的切片HE染色,光镜观察。取最大剖面的切片,光镜下计数具有正常卵泡结构的卵泡数(双侧卵巢的卵泡数相加),分别测定各组大鼠的初级卵泡、生长卵泡、成熟卵泡、总卵泡数。卵泡分级标准为:初级卵泡直径2530μm,生长卵泡直径31400μm,成熟卵泡直径650700μm[3]。1.6ERα的检测按SP法(链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)进行免疫组化染色,二甲苯脱蜡,梯度酒精水化,3%过氧化氢室温孵育,微波修复抗原,羊血清封闭,37℃孵育15min,滴加1∶250稀释的ERα兔抗大鼠单克隆抗体,4℃

4、孵育过夜,再依次加入生物素偶联的羊抗兔IgG抗体和辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素,各37℃孵育15min,DAB染色,显微镜下控制显色,苏木素复染,常规脱水、透明、树胶封片。阴性对照以0.05mol·L-1PBS代替一抗,得阴性结果。以人乳腺癌组织作为阳性对照,得阳性结果。根据染色面积和强度按下列方法进行半定量评分:0,无染色或微弱染色;1,染色面积<25%;2,染色面积在25%50%;3,50%<染色面积≤75%;4,染色面积>75%。1.7统计学处理实验数据用x-±s表示,采用SPSS11.5统计软件,组间差异比较用独立样本的t检验,免疫组化评分结果用成

5、组设计两样本比较的秩和检验(g·kg-1组的大鼠用药7d后阴道涂片显示,出现大量有核上皮细胞(动情前期)和大量无核角化细胞(动情期)的时间明显延长,而出现白细胞、少量角化细胞及有核细胞(动情后期)和大量白细胞、上皮细胞及黏液(动情期间)的时间缩短。200mg·kg-1壬基酚组和乙菧酚组的大鼠用药7d后,阴道涂片长时间观察到大量无核角化细胞,即出现持续动情期。阴性对照组和50mg·kg-1壬基酚组的大鼠直到处死前皆能观察到规律的性周期。2.2血清中的E2、LH水平100、200mg·kg-1壬基酚组和乙菧酚组的大鼠血清E2、LH水平均降低,与相应阴性对照组相比较,差

6、异有显著性(P<0.05)(表1)。表1各组大鼠E2、LH测定结果1)与阴性对照组比较,P>0.05;2)与低剂量组比较,P<0.05;3)与中剂量组比较,P<0.05;4)与高剂量组比较,P<0.052.3垂体、卵巢、子宫组织形态学变化2.3.1垂体各组均见嫌色细胞数量最多,成群分布,嗜酸细胞次之,嗜碱细胞单个分布,数量最少,血窦丰富,高剂量壬基酚组见到少量的凋亡小体(图1、2)。2.3.2卵巢阴性对照组可见原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡,黄体数目较多,间质少,间质腺少见,血管丰富。壬基酚各组随着剂量的增加,总卵泡数减少,尤其是成熟卵泡数减少最为明显,闭

7、锁卵泡数增多,差异有显著性(P<0.05)。乙菧酚组总卵泡数也明显减少,高剂量壬基酚组变化与此相似(图3、4,表2)。表2各组大鼠双侧卵巢卵泡数比较与阴性对照组比较,1)P>0.05,2)P<0.05;3)与低剂量组比较,P<0.05;与中剂量组比较,4)P<0.05,5)P>0.05;6)与高剂量组比较,P>0.052.3.3子宫各组大鼠子宫变化相似,黏膜厚,约占子宫壁的2/3,上皮以分泌细胞为主,固有层有大量子宫腺体,腺腔大,结缔组织疏松,有丰富的毛细血管及小动静脉。基层较厚,平滑肌细胞正常。2.4子宫ER的表达大鼠子宫组织ER蛋白主要表达在子宫内膜上皮细胞、

8、子宫腺上皮

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