壬基酚对成年雌性sd大鼠生殖功能的影响

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1、壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响【摘要】目的：观察壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响。方法：对成年雌性SD大鼠每天灌胃壬基酚（50、100、200mg·kg-1），阳性对照组每天灌胃乙菧酚（0.2mg·kg-1），阴性对照组管饲花生油。通过阴道涂片观察性周期的变化，28d后处死大鼠，放免法测定血清雌激素、黄体生成素浓度，并作垂体、子宫、卵巢组织病理学检查，免疫组化技术检测子宫的雌激素受体（ER）表达情况。结果：壬基酚剂量≥100mg·kg-1可使大鼠出现持续动情期，血清雌激素、黄体生成素水平降低（P＜0.05），卵巢组织病理学切片显示卵泡数目减少（P＜0

2、.05），子宫ER表达无明显差异。结论：壬基酚在较高浓度时可抑制雌性大鼠的生殖功能。【关键词】壬基酚生殖功能大鼠SpragueDag·kg-1分为低、中、高剂量组，阴性对照组为管饲花生油，阳性对照组为乙菧酚0.2mg·kg-1。饲养28d，每天阴道涂片，观察动情周期，在动情期（阴道涂片示大量无核角化细胞）处死大鼠。10%水合氯醛（每100g质量0.3ml）腹腔注射麻醉，眶后静脉丛采血，取血清置-70℃冰箱待用。按液体灌注固定方法，分离出垂体、子宫、卵巢，继续固定、脱水、透明，浸蜡包埋，制成4μm厚的石蜡切片。1.4E2、LH测定方法按试剂盒操作说明，采用放射免疫

3、法测定上述待用血清中的E2、LH水平。1.5组织形态学观察及卵泡计数上述的切片HE染色，光镜观察。取最大剖面的切片，光镜下计数具有正常卵泡结构的卵泡数（双侧卵巢的卵泡数相加），分别测定各组大鼠的初级卵泡、生长卵泡、成熟卵泡、总卵泡数。卵泡分级标准为：初级卵泡直径2530μm，生长卵泡直径31400μm，成熟卵泡直径650700μm［3］。1.6ERα的检测按SP法（链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法）进行免疫组化染色，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢室温孵育，微波修复抗原，羊血清封闭，37℃孵育15min，滴加1∶250稀释的ERα兔抗大鼠单克隆抗体，4℃

4、孵育过夜，再依次加入生物素偶联的羊抗兔IgG抗体和辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素，各37℃孵育15min，DAB染色，显微镜下控制显色，苏木素复染，常规脱水、透明、树胶封片。阴性对照以0.05mol·L-1PBS代替一抗，得阴性结果。以人乳腺癌组织作为阳性对照，得阳性结果。根据染色面积和强度按下列方法进行半定量评分：0,无染色或微弱染色；1,染色面积＜25%；2,染色面积在25%50%；3,50%<染色面积≤75%；4,染色面积＞75%。1.7统计学处理实验数据用x-±s表示，采用SPSS11.5统计软件，组间差异比较用独立样本的t检验，免疫组化评分结果用成

5、组设计两样本比较的秩和检验（g·kg-1组的大鼠用药7d后阴道涂片显示，出现大量有核上皮细胞（动情前期）和大量无核角化细胞（动情期）的时间明显延长，而出现白细胞、少量角化细胞及有核细胞（动情后期）和大量白细胞、上皮细胞及黏液（动情期间）的时间缩短。200mg·kg-1壬基酚组和乙菧酚组的大鼠用药7d后，阴道涂片长时间观察到大量无核角化细胞，即出现持续动情期。阴性对照组和50mg·kg-1壬基酚组的大鼠直到处死前皆能观察到规律的性周期。2.2血清中的E2、LH水平100、200mg·kg-1壬基酚组和乙菧酚组的大鼠血清E2、LH水平均降低，与相应阴性对照组相比较，差

6、异有显著性（P＜0.05）（表1）。表1各组大鼠E2、LH测定结果1）与阴性对照组比较，P＞0.05；2）与低剂量组比较，P＜0.05；3）与中剂量组比较，P＜0.05；4）与高剂量组比较，P＜0.052.3垂体、卵巢、子宫组织形态学变化2.3.1垂体各组均见嫌色细胞数量最多，成群分布，嗜酸细胞次之，嗜碱细胞单个分布，数量最少，血窦丰富，高剂量壬基酚组见到少量的凋亡小体（图1、2）。2.3.2卵巢阴性对照组可见原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡，黄体数目较多，间质少，间质腺少见，血管丰富。壬基酚各组随着剂量的增加，总卵泡数减少，尤其是成熟卵泡数减少最为明显，闭

7、锁卵泡数增多，差异有显著性（P＜0.05）。乙菧酚组总卵泡数也明显减少，高剂量壬基酚组变化与此相似（图3、4，表2）。表2各组大鼠双侧卵巢卵泡数比较与阴性对照组比较，1)P＞0.05,2)P＜0.05；3）与低剂量组比较，P＜0.05；与中剂量组比较，4)P＜0.05,5)P＞0.05；6）与高剂量组比较，P＞0.052.3.3子宫各组大鼠子宫变化相似，黏膜厚，约占子宫壁的2/3，上皮以分泌细胞为主，固有层有大量子宫腺体，腺腔大，结缔组织疏松，有丰富的毛细血管及小动静脉。基层较厚，平滑肌细胞正常。2.4子宫ER的表达大鼠子宫组织ER蛋白主要表达在子宫内膜上皮细胞、

8、子宫腺上皮