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时间:2018-11-19
《大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元na+,k+论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元Na+,K+论文郭芳,吕平,李树民,王永利【关键词】Na+,,K+ChangeofNa+,K+ATPaseαisoformsinratneuronsdamagedbyglobalcerebralischemia/reperfusion【Abstract】AIM:ToinvestigatethechangeofNa+,K+ATPaseαisoformsinratneuronsdamagedbyglobalcerebralischemia/reperfusion.METHODS:Theglobralcerebralischemia(15min)inratset
2、hodandtheratsin.g2+4μL,OligdT1μL,RNA酶抑制剂0.5μL,RNA2.5μL,AMV0.8μL,42℃15~60min,95℃5min灭活.PCR反应:Buffer5μL,dNTP4μL,GAPDH上游引物1.3μL,GAPDH下游引物1.3μL,α1上游引物2.2μL,α1下游引物1.9μL,TaqDNA聚合酶0.4μL,反转录产物2μL,加水至50μL,94℃预变性5min,94℃变性40s,45℃退火45s,72℃延伸45s,共30个循环,72℃延伸10min.PCR产物6μL,与上样缓冲液混合后进行15g/L琼脂糖电泳,凝胶成像系统拍照,Bio
3、1D软件进行图像分析,测定产物条带的光密度,计算目标产物与GAPDH的比值.统计学处理:实验数据用x±s表示.采用SPSS10.0软件进行样本方差分析及SNKq检验.2结果2.1海马和皮层神经元形态变化假手术组海马及皮层锥体细胞,排列整齐紧密,细胞核大而圆、透明,有1~2个明显核仁.缺血15min组及再灌注30min组,锥体细胞尼氏小体消失,细胞间隙扩大,可见红色神经元,表明细胞出现明显的水肿(图1).A:正常海马神经元形态结构;B:缺血15min海马神经元形态结构;C:再灌注30min海马神经元形态结构.图1缺血及再灌注损伤海马神经元的改变HE×200(略)2.2海马和皮层神经元N
4、a+,K+ATP酶α亚基表达的变化假手术组大鼠海马和皮层神经元主要分布有Na+,K+ATP酶的α1和α3亚基,而少有α2的表达,海马神经元α3亚基的表达多于α1亚基,皮层神经元上两种亚基的表达无显著性差异.大鼠全脑缺血15min和再灌注30min后,海马神经元α1和α3亚基的表达均明显减少,皮层神经元的α1亚基在缺血15min后无明显改变,而α3亚基有明显改变,在再灌注后30min,α1和α3亚基均有明显减少(图2,表1).A:正常皮层神经元α1亚基的表达;B:缺血15min皮层神经元α1亚基的表达;C:再灌注30min皮层神经元α1亚基的表达.图2缺血及再灌注损伤海马神经元α1亚基
5、的改变免疫组织化学染色×200(略)表1Na+,K+ATP酶α1和α3亚基的表达(略)aP0.05vs假手术;bP0.05vsα1亚基.2.3Na+,K+ATP酶α1和α3亚基的mRNA的表达假手术组海马神经元α3亚基mRNA的表达多于α1亚基,皮层神经元上两种亚基的表达无明显的差异.大鼠全脑缺血15min和再灌注30min后,海马神经元和皮层神经元钠泵两种亚基mRNA的表达均无明显的改变(图3,表2).3讨论脑组织Na+,K+ATP酶对缺血缺氧非常敏感,脑缺血缺氧后可致其活性降低[4].缺血及再灌注对Na+,K+ATP酶活性的影响有着区域性的差异,缺血后海马突触体Na+,K+ATP
6、酶活性立即下降,而新皮层部位的酶活性却有升高趋势,再灌注后各区Na+,K+ATP酶活性均减低[5].1,3:海马α1亚基;2,4:海马α3亚基;M:marker;5,7:皮层α1亚基;6,8:皮层α3亚基.图3大鼠全脑缺血后脑组织Na+,K+ATP酶α亚基RTPCR产物电泳(略)表2Na+,K+ATP酶α亚基mRNA的表达(略)aP0.05vsα1亚基.我们在实验中探讨了缺血及再灌注损伤Na+,K+ATP酶α亚基在蛋白水平上的改变,结果表明海马和皮层α亚基在缺血及再灌注损伤中的反应性的不同,其原因可能在缺血期皮层体积较大,且血管网密度高,能量供应相对较丰富,可代偿性的维持Na+,K+
7、ATP酶活性.而在再灌注期则失代偿[6].在mRNA水平上,海马神经元和皮层神经元α亚基mRNA的表达与蛋白的表达不一致,其可能的原因①与基因转录后调节有关,从mRNA翻译为蛋白的过程中受到多种因素的调节,而这种转录后调节在不同亚单位间可能存在差异;②mRNA与蛋白的半衰期不同,mRNA极易降解,在组织内存在时间较短,而翻译成蛋白后性质相对稳定;③正常状态下细胞内可能有一定量的Na+,K+ATP酶储备,不行使功能,而这种储备量的多少在不同组织中可能有所不同
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