大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元na+,k+论文

《大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元na+,k+论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元Na+,K+论文郭芳，吕平，李树民，王永利【关键词】Na+,,K+ChangeofNa+,K+ATPaseαisoformsinratneuronsdamagedbyglobalcerebralischemia/reperfusion【Abstract】AIM:ToinvestigatethechangeofNa+,K+ATPaseαisoformsinratneuronsdamagedbyglobalcerebralischemia/reperfusion.METHODS:Theglobralcerebralischemia(15min)inratset

2、hodandtheratsin.g2＋4μL，OligdT1μL，RNA酶抑制剂0.5μL，RNA2.5μL，AMV0.8μL，42℃15~60min，95℃5min灭活.PCR反应：Buffer5μL，dNTP4μL，GAPDH上游引物1.3μL，GAPDH下游引物1.3μL，α1上游引物2.2μL，α1下游引物1.9μL，TaqDNA聚合酶0.4μL，反转录产物2μL，加水至50μL，94℃预变性5min，94℃变性40s，45℃退火45s，72℃延伸45s，共30个循环，72℃延伸10min.PCR产物6μL，与上样缓冲液混合后进行15g/L琼脂糖电泳，凝胶成像系统拍照，Bio

3、1D软件进行图像分析，测定产物条带的光密度，计算目标产物与GAPDH的比值.统计学处理：实验数据用x±s表示.采用SPSS10.0软件进行样本方差分析及SNKq检验.2结果2.1海马和皮层神经元形态变化假手术组海马及皮层锥体细胞，排列整齐紧密，细胞核大而圆、透明，有1～2个明显核仁.缺血15min组及再灌注30min组，锥体细胞尼氏小体消失，细胞间隙扩大，可见红色神经元，表明细胞出现明显的水肿（图1）.A:正常海马神经元形态结构；B:缺血15min海马神经元形态结构；C:再灌注30min海马神经元形态结构.图1缺血及再灌注损伤海马神经元的改变HE×200（略）2.2海马和皮层神经元N

4、a+，K+ATP酶α亚基表达的变化假手术组大鼠海马和皮层神经元主要分布有Na+，K+ATP酶的α1和α3亚基，而少有α2的表达，海马神经元α3亚基的表达多于α1亚基，皮层神经元上两种亚基的表达无显著性差异.大鼠全脑缺血15min和再灌注30min后，海马神经元α1和α3亚基的表达均明显减少，皮层神经元的α1亚基在缺血15min后无明显改变，而α3亚基有明显改变，在再灌注后30min，α1和α3亚基均有明显减少（图2，表1）.A:正常皮层神经元α1亚基的表达；B:缺血15min皮层神经元α1亚基的表达；C:再灌注30min皮层神经元α1亚基的表达.图2缺血及再灌注损伤海马神经元α1亚基

5、的改变免疫组织化学染色×200（略）表1Na+，K+ATP酶α1和α3亚基的表达（略）aP0.05vs假手术；bP0.05vsα1亚基.2.3Na+，K+ATP酶α1和α3亚基的mRNA的表达假手术组海马神经元α3亚基mRNA的表达多于α1亚基，皮层神经元上两种亚基的表达无明显的差异.大鼠全脑缺血15min和再灌注30min后，海马神经元和皮层神经元钠泵两种亚基mRNA的表达均无明显的改变（图3，表2）.3讨论脑组织Na+,K+ATP酶对缺血缺氧非常敏感，脑缺血缺氧后可致其活性降低［4］.缺血及再灌注对Na+，K+ATP酶活性的影响有着区域性的差异，缺血后海马突触体Na+，K+ATP

6、酶活性立即下降，而新皮层部位的酶活性却有升高趋势，再灌注后各区Na+，K+ATP酶活性均减低［5］.1,3:海马α1亚基;2,4:海马α3亚基;M:marker;5,7:皮层α1亚基;6,8:皮层α3亚基.图3大鼠全脑缺血后脑组织Na+，K+ATP酶α亚基RTPCR产物电泳（略）表2Na+，K+ATP酶α亚基mRNA的表达（略）aP0.05vsα1亚基.我们在实验中探讨了缺血及再灌注损伤Na+，K+ATP酶α亚基在蛋白水平上的改变，结果表明海马和皮层α亚基在缺血及再灌注损伤中的反应性的不同，其原因可能在缺血期皮层体积较大，且血管网密度高，能量供应相对较丰富，可代偿性的维持Na+，K+

7、ATP酶活性.而在再灌注期则失代偿［6］.在mRNA水平上，海马神经元和皮层神经元α亚基mRNA的表达与蛋白的表达不一致，其可能的原因①与基因转录后调节有关，从mRNA翻译为蛋白的过程中受到多种因素的调节,而这种转录后调节在不同亚单位间可能存在差异；②mRNA与蛋白的半衰期不同，mRNA极易降解,在组织内存在时间较短,而翻译成蛋白后性质相对稳定；③正常状态下细胞内可能有一定量的Na+，K+ATP酶储备，不行使功能,而这种储备量的多少在不同组织中可能有所不同