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1、大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元Na+,K+作者：郭芳，吕平，李树民，王永利【关键词】Na+,,K+ ChangeofNa+,K+ATPaseαisoformsinratneuronsdamagedbyglobalcerebralischemia/reperfusion 【Abstract】AIM:ToinvestigatethechangeofNa+,K+ATPaseαisoformsinratneuronsdamagedbyglobalcerebralischemia/reperfusion.METHODS:Theglobra
2、lcerebralischemia(15min)inratsethodandtheratsin.munohistochemicalassay,theexpressionoftheNa+,K+ATPaseαisoformspalandcorticalneuronsfolloia/reperfusion.RESULTS:Thepyramidalcellsduringischemia/reperfusiondisplayednotableedema.Theα1,α2orα3isoformofNa+,K+ATPasedistributed
3、inatissuespecificfashioninneuronsofhippocampusandcortex,andα3isoformorethanα2andα1isoformsinhippocampus,sintheratssufferingischemia/reperfusionpus(P<0.05or0.01).Hoinischemiaanddeclinedin30minreperfusion(P<0.05).Inbothischemiaandreperfusion,themRNAexpressionsofα1
4、andα3isoformsatmRNAlevelhadnosignificantchangeasparedoperatedgroup.CONCLUSION:Thechangeoftheexpressionsofα1andα3isoformsmayinvolveinglobalcerebralischemia/reperfusioninjury. 【Keyia;αisoform;reperfusion 【摘要】目的：研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后，神经元Na+,K+ATP酶α亚基三种异构体的变化.方法：采用四血管闭塞法（Pulsi
5、nelli4VO）制作全脑缺血15min再灌注30min损伤模型，采用免疫组织化学技术和RTPCR的方法，检测缺血及再灌注损伤Na+,K+ATP酶α亚基的改变.结果：缺血及再灌注损伤后，神经元明显水肿；假手术组海马和皮层神经元上主要表达有α1和α3亚基，且α3的含量较α1多，缺血15min及再灌注30min后，海马神经元α1和α3亚基的表达明显减少(P<0.05，P<0.01)，缺血15min后，皮层神经元α1和α3亚基的表达无明显改变，而再灌注30min后表达减少(P<0.05)；缺血及再灌注时α1和α3亚基在
6、mRNA水平上的表达与假手术组相比无明显改变.结论：Na+,K+ATP酶α1和α3亚基可能参与了缺血再灌注脑损伤. 【关键词】Na+,K+ATP酶；脑缺血；α亚基；再灌注 0引言 Na+，K+ATP酶（钠泵），是存在于多种真核细胞膜上的多功能蛋白多聚体.脑缺血缺氧后Na+,K+ATP酶活性降低，可导致细胞内Na+增多，渗透压升高，大量的H2O进入细胞内，造成神经元的急性肿胀、变性和坏死，导致细胞外K+增多，使细胞膜持续去极化而影响兴奋传递、递质释放等［1］.Na+,K+ATP酶的结合，转运和药理学的特性取决于其α亚单位.目前
7、关于α亚单位在缺血再灌注损伤中的改变少见报道［2］.我们采用RTPCR技术和免疫组织化学技术，探讨大鼠全脑缺血再灌注损伤后Na+，K+ATP酶α亚基在mRNA和蛋白水平上表达的改变，以及Na+，K+ATP酶功能异常与缺血性脑损伤之间的关系. 1材料和方法 1.1材料小鼠抗大鼠Na+，K+ATP酶α1亚单位，兔抗鼠Na+，K+ATP酶α2,α3亚单位多克隆抗体购于美国Santa公司；生物素标记的羊抗兔和羊抗鼠IgG，辣根酶标记链酶卵白素购于北京中山生物技术有限公司；反转录试剂盒购于美国Promega公司；其余试剂均为国产分析纯.
8、健康SD雄性大鼠18只，体质量250～300g，由河北医科大学实验动物中心提供. 1.2方法 1.2.1动物分组将大鼠随机分为3组，每组6只.假手术组：麻醉后仅暴露双侧第1颈椎横突板，分离双侧颈总动脉，不电灼凝固双侧椎动脉，不夹闭双侧颈总动脉；
