tk gcv、cd 5fc双自杀基因系统治疗结肠癌的实验研究

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1、TKGCV、CD5Fc双自杀基因系统治疗结肠癌的实验研究作者：魏冬韦军民黄美雄何庆泗苏伟　【摘要】目的观察胸苷激酶/丙氧鸟苷(TK/GCV)、胞嘧啶脱氨酶/5氟胞嘧啶(CD/5Fc)双自杀基因系统对结肠癌的治疗效果，并结合研究结果进行作用机理的分析。方法采用培养细胞移植法，将人结肠癌细胞系SethodsByusingtransplantationofthecultivatedcells,humancolocarcinomacelllineSice结肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈上升趋势。对结肠癌的深入研究是我国肿瘤研究的重要课题。肿瘤的基因治疗正由实验研究走向临床，自

2、杀基因治疗作为一种新兴的基因治疗方法，可能成为一种临床应用极具潜力的治疗手段。目前，胸苷激酶/丙氧鸟苷(TK/GCV)系统和胞嘧啶脱氨酶/5氟胞嘧啶(CD/5Fc)系统在自杀基因的研究中应用较多。为了进一步探讨TK/GCV、CD/5Fc双自杀基因系统用于人结肠癌基因治疗的可能性，本课题通过建立SI1640含新生牛血清和双抗的培养液中，37℃恒温孵育，获得生长达80%汇合的Sl的细胞悬液，接种于裸鼠(SPF级BALB/CAnu品系，4周龄，体重16～20g，雌性)背部皮下，0.2ml/只，待肿瘤长至0.5cm3左右时，开始基因治疗。　1.2分组与给药将荷瘤裸鼠随机分为4组(每

3、组8只)：①空白对照组；②TK/GCV治疗组：山东大学齐鲁医院肿瘤中心实验室提供PA317/TKCD细胞，采用逆转录病毒介导，1×109PFU瘤内注射，每天1次，连续3d，注射后48h，开始腹腔注射GCV100mg·kg-1·d-1，连续10d；③CD/5Fc治疗组：1×109PFU瘤内注射，每天1次，连续3d，注射后48h，开始腹腔注射5Fc500mg·kg-1·d-1，连续10d；④TK/GCV+CD/5Fc联合治疗组：1×109PFU瘤内注射，每天1次，连续3d，注射后48h，开始腹腔注射GCV100mg·kg-1·d-1，5Fc500mg·kg-1·d-1，连续10

4、d。1.3疗效观察(1)每天观察小鼠的生存状况及肿瘤生长情况。(2)肿瘤体积：基因治疗开始后记为第1周，用游标卡尺每周测量肿瘤的长径L，短径R，按V=1/2(LR2)计算肿瘤体积，连续7周。并根据体积绘制各组肿瘤生长曲线。(3)肿瘤生长抑制率：E=(对照组平均肿瘤体积增长数-治疗组平均肿瘤体积增长数)/对照组平均肿瘤体积增长数×100%。计算q值=E4/［E2+E3(1-E2)］，E2、E3、E4分别为TK/GCV治疗组、CD/5Fc治疗组、TK/GCV+CD/5Fc联合治疗组的肿瘤生长抑制率，根据q值来判断联合用药的疗效：q值<0.85为拮抗，0.85～1.15为相加，&

5、gt;1.15为协同。(4)瘤重：基因治疗完成后，即从第3周开始，每周每组脱颈处死1只裸鼠,用电子天平称量瘤重，连续5周。剩余小鼠留做生存期的观测。(5)解剖并观察转移情况。(6)形态学观察：大体形态及光镜观察肿瘤组织的病理变化。(7)生存期：从基因治疗完成后算起，并计算各治疗组的生命延长率=(治疗组平均存活时间-对照组平均存活时间)/对照组平均存活时间×100%［2］。1.4统计学处理采用方差分析处理实验数据，采用最小显著差(LSD)t检验进行每两组间差异显著性的检验，采用2×2析因分析检验TK/GCV、CD/5Fc双自杀基因系统是否存在交互协同作用。统计处理应用SPSS11.0

6、统计软件包。2结果2.1小鼠的生存状况及肿瘤生长情况对照组裸鼠移植瘤实验过程中部分出现表面坏死、破溃感染，后期有恶病质表现。治疗组治疗过程中移植瘤表面光滑完整，裸小鼠无恶病质表现，一般情况、食欲、精神状态及皮肤反应均无改变。2.2肿瘤体积各组肿瘤体积生长曲线见图1。第7周较第1周的体积增加数均值分别为：空白对照组(2.618±0.223)cm3，TK/GCV治疗组(2.156±0.242)cm3，CD/5Fc治疗组(2.044±0.191)cm3，TK/GCV+CD/5Fc联合治疗组(1.052±0.173)cm3。方差分析及最小显著差(LSD)t检验表明，各组间比较差异有统计学

7、意义(P<0.05)。即各治疗组对抑制肿瘤的增长均有显著意义，TK/GCV+CD/5Fc联合治疗组效果最强。2.3各治疗组的肿瘤生长抑制率根据第7周的体积增长结果：E217.7%，E321.9%，E459.8%%。联合基因治疗的疗效q值=1.675>1.15。说明TK/GCV、CD/5Fc有协同作用。2.4瘤重4组裸鼠第3～7周瘤重见表1。表14组裸鼠第3～7周瘤重2.5转移情况肉眼及病理证实对照组裸鼠有淋巴结及肝、肺转移。治疗组每只裸鼠的