a20在前列腺癌细胞中的表达论文

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1、A20在前列腺癌细胞中的表达论文.freelRNA的表达,细胞中A20在mRNA和蛋白质表达水平均显著高于其余3种细胞系(P001)。结论:A20在各前列腺癌细胞系中的表达不尽相同,.freelAb）购自Calbiochem公司;羊抗小鼠的二抗,ECM显色液及βactinmAb购自武汉博士德公司;Trizol试剂购自Invitrogen公司;cDNA反转录试剂盒购自Promega公司,细胞裂解液为碧云天公司产品。电转印仪为BIORAD公司Mini2Dcell电转印仪,DU800核酸蛋白分析仪为贝克曼公司产品。所有引物均由TaKaR

2、a公司合成。1.2方法1.2.1细胞培养PC3、PC3M、DU145、LNCaP和22RV1细胞均用含100mL/L小牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的RPMI1640在37℃,50mL/LCO2培养箱中常规传代培养。1.2.2RTPCR检测mRNA提取总RNA,然后加入20μLDEPC处理的水溶解所提取的RNA,将稀释后的RNA在DU800核酸蛋白分析仪上检测,测得A260/280大于18,说明所提取的RNA质量好。取2μgRNA按照Promega的逆转录试剂盒说明书,反转录出cDNA后,进行PCR。PCR的反

3、应条件为:95℃5min,95℃40s,63℃1min,72℃15min,72℃7min共30个循环。A20的引物如下:正义链5′AGCCCTCATCGACAGAAACATCCAG3′,反义链:5′CGCTGTTTTCCTGCCATTTCTTGTA3′,扩增片断长度882bp。内参照选用βactin,引物正义链:5′GCTCGTCGTCGACAACGGCTC3′,反义链:5′CAAACATGATCTGGGTCATCTTCTC3′,产物长度353bp。扩增产物15g/L琼脂糖凝胶电泳,EB染色后,电泳条带经电泳图像分析扫描仪扫描,得

4、到βactin条带,调整cDNA的用量使5个细胞系中βactin条带的浓度一致,然后进行A20基因的扩增,电泳条带经电泳图像分析扫描仪扫描,得到A20的条带。经图像分析软件分析,得到各A20条带的灰度值,峰高及密度。1.2.3、Du145与22RV1之间有显著统计学差异(P001),LNcap与22RV1之间没有统计学差异(P005),说明A20在不同的前列腺癌细胞系中表达水平有差别,在PC3、PC3M中表达相对较高（表1）。图15种前列腺癌细胞A20的RTPCR结果（略）M:DL2000marker;1:PC3;2:PC3M;3

5、:DU145;4:LNcap;5:22RV1.表1A20RTPCR产物琼脂糖电泳图像扫描分析结果（略）bP0.01vs22RV1.2.2r)80000附近,PC3、PC3M、Du145、LNcap与22RV1细胞均有阳性条带,与预期结果一致。通过与内参βactin（Mr42000）比较显示,PC3,PC3M中表达相对较高,22RV1中表达相对较低（图2）。图25种前列腺癌细胞A20的蛋白质结果（略）1:PC3;2:PC3M;3:DU145;4:LNcap;5:22RV1.3讨论A20最初被认为是一种TNF诱发凋亡的抑制因子1,2。

6、对很多细胞系而言,A20稳定的高表达能够抑制TNF诱导的细胞凋亡。目前研究证实IL1和CD40等分子均可引起A20的高表达7,然而并不是在所有的细胞中,A20均表现出抑制细胞凋亡,保护细胞的功能。在人类乳腺癌MCF7细胞、鼠成纤维细胞瘤,Du145和22RV1中的表达国内外未见报道。A20蛋白和mRNA的表达水平经方差分析显示表达水平不全相同(P001),采用多样本均数间的两两比较（LSD）采用方差分析（ANOVA）,PC3、PC3M、DU145与22RV1之间结果有统计学差异(P001),而LNCaP与22RV1之间没有统计学差

7、异(P005),说明A20蛋白和mRNA在不同的前列腺癌细胞中表达水平不同,PC3和PC3M细胞中的表达相对较高。A20能够直接负反馈调节NFκB的表达,从而将炎症反应限制到一定程度;它还在某些细胞系中表现出抑制细胞凋亡,保护细胞的功能。对A20在前列腺癌中的研究将有可能为前列腺癌的治疗提供新的靶点和思路。