前列腺酸性磷酸酶在非前列腺腺癌中的表达论文

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1、前列腺酸性磷酸酶在非前列腺腺癌中的表达论文王毅，王芳，宿晓云，原田守，山田亮，伊东恭悟，颜炜群【摘要】目的：探讨前列腺相关抗原前列腺酸性磷酸酶（PAP）在非前列腺癌中的表达水平.方法：分别用RTPCR方法和KN7,MKN28和MKN45）和7种乳腺癌细胞（OCUBF,OCUBM,R27,MCF7,CRL1500,YMB1E和MDAMB231）表达PAPmRNA和PAP蛋白，结肠癌、胃癌和乳腺癌肿瘤组织中PAP呈阳性表达.在检测的5种肾细胞癌细胞和肾细胞癌组织中均未发现有PAP的表达.结论：PAP是结肠癌、胃癌和乳腺癌的新靶点.【关键词】酸性磷酸酶；前列腺；腺癌【

2、Abstract】AIM:Tostudytheexpressionofprostaticacidphosphatase(PAP),aprostaterelatedantigen,innonprostatecancercellsortissues.METHODS:AvarietyofadenocarcinomacelllinesinedfortheirPAPexpressionatthemRNAandproteinlevelsbyRTPCRandKN7,.freelRNAandproteinlevels.Butisas,includingcolon,breastandgastricc

3、ancers.【Keya引言前列腺酸性磷酸酶（prostaticacidphosphatase,PAP）最早发现于1938年［1］.freelphoma）的肿瘤标志物［10］.Inoue等［11］也曾报道了PAP在食道癌和肺鳞片细胞癌细胞中的表达.本研究拟在此基础上，进一步探讨PAP在其他腺癌中的表达水平，为非前列腺癌的特异性免疫治疗提供新的靶点.1材料和方法1.1材料结肠癌细胞系(colo201,colo205,colo320,SKN7,MKN28,MKN45和KATOIII),乳腺癌细胞系(OCUBF,OCUBM,R27,MCF7,CRL1500,YMB1E和MD

4、AMB231)，肾细胞癌细胞系（RC3014,Caki1,VMRCRCAMIYA和KUR11），前列腺癌细胞系LNCaP.RNABee试剂（TELTEST），RTPCR试剂盒（Takara），TaqDNA聚合酶(PromegaCorp)，胰蛋白酶抑制剂，苯甲磺酰氟（Sigma），PAP抗体(ScyTekLaboratories.)，KIT试剂盒（DAKO）.1.2方法1.2.1RNA提取及RTPCR按照RNABee说明书提取处于对数生长期细胞的总RNA，其中5μg总RNA用于cDNA的合成.用于PAP表达检测的PAP特异性引物为:上游引物:5′CTCCTCAACAT

5、GAGAGCTGC3′,下游引物：5′TATATACTCTCCAAGTTCATA3′.利用TaqDNA聚合酶进行PCR反应，共30个循环（95℃1min,60℃1min,72℃1min）.PCR产物在20g/L琼脂糖凝胶上进行检测.1.2.2Cs）分别作为阳性和阴性对照.1.2.3免疫组化甲醛固定、石腊包埋的病理切片经脱石腊后，置于含30mL/LH2O2的甲醇溶液中来封闭内源性过氧化物酶活性，然后在加入第一抗体之前，用血清进行孵育以减少非特性染色.按照说明书，利用CSASYSTEMKIT试剂盒和羊抗人PAP抗体进行免疫组织化学检测.2结果2.1PAPmRNA在非前列腺腺癌细胞中的表达

6、在所检测的5种结肠癌、4种胃癌、7种乳腺癌和5种肾癌细胞中，3种结肠癌细胞（colo201,colo205和colo320)、3种胃癌细胞(MKN7,MKN28和MKN45)以及所有的7种乳腺癌细胞中(OCUBF,OCUBM,R27,MCF7,CRL1500,YMB1E和MDAMB231)检测到PAPmRNA的表达；而在5种肾癌细胞中均未检测到PAPmRNA的表达（图1）.2.2PAP蛋白在非前列腺癌细胞中的表达在3种结肠癌细胞(colo201,colo205和colo320)、2种胃癌细胞(MKN28和MKN45)以及4种乳腺癌细胞(OCUBF,OCUBM

7、,CRL1500和MDAMB231)中检测到PAP蛋白的表达.虽然在PCR结果中检测到MKN7,R27,MCF7和YMB1E细胞中有PAPmRNA的表达，但是在CSF重组融合蛋白的自体树状细胞对非荷尔蒙依赖性前列腺癌患者进行了一期临床试验，结果表明这种以PAP为靶点的特异性免疫治疗是安全的，疾病进展所需的时间与抗PAP免疫应答的产生密切相关.其他研究报道利用具有HLAA2结合位点的PAP多肽对男性健康