比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量论文

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1、比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量论文季春张融胡晨游文玮佟丽【摘要】目的建立南蛇藤提取物总三萜类成分的含量测定方法，为南蛇藤药材的质量控制提供依据。方法采用比色法进行测定，以齐墩果酸为对照品，样品经5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色，在560nm处测定。结果在0.42～16.8μg·ml-1范围内吸光度与含量成良好的线性关系，r=0.9993（n=7），平均加样回收率为98.22%，RSD=3.77%（n=6）。结论该法操作简便、快速、灵敏.freelg，置10ml容量瓶中用甲醇定容。再准确移取2ml此溶液至10m

2、l容量瓶中并用甲醇定容，制成0.21mg·ml-1对照品溶液。2.2供试品溶液的制备称取南蛇藤原药材1000g，用8倍量75%乙醇回流提取2h，过滤，滤渣再用5倍量75%乙醇回流提取1h，过滤，合并滤液并浓缩至每克浸膏相当于原药材2～4g。浸膏用蒸馏水洗涤，60℃恒温箱干燥24h。精密称取该干燥粉末100mg，用甲醇超声提取30min，转移至100ml容量瓶中定容。准确移取4ml至100ml容量瓶中用甲醇定容，即得浓度为0.04mg·ml-1的供试品溶液。2.3测定波长的选择取齐墩果酸对照品溶液，（空白对照为不加

3、对照品溶液用醋酸乙酯稀释至刻度的混合溶液）加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml显色［6］后，进行可见-紫外全波长扫描。结果表明，对照品溶液在560nm处有最大吸收峰（如图1），多次重复，峰形一致且空白对照无干扰，故选择560nm作为样品测定的波长。图1齐墩果酸可见-紫外吸收峰图2.4标准曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.02，0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8ml，水浴挥干，分别加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml［6］，置70℃水浴加热15min，迅速冰浴冷却后，转移

4、至10ml的量瓶中加醋酸乙酯定容至刻度，摇匀。在560nm波长处测定吸收值A，空白对照为不加对照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，用醋酸乙酯稀释至刻度的混合溶液。标准曲线：A=59.983C-0.0206，其中C为浓度(mg·ml-1)，A为吸收度。相关系数：r=0.9993，线性范围为0.42～16.8μg·ml-1。2.5稳定性实验取样品溶液，照“2.4”项下操作，每隔0.5h测定一次，前5次测定值RSD=5.16%(n=5)，结果表明，本方法在2h内基本稳定。2.6回收率实验精密

5、称取样品4mg于100ml容量瓶中用甲醇定容，精密称取齐墩果酸对照品4mg于10ml容量瓶中用甲醇定容，准确移取2ml供试品溶液和75μl对照品溶液于具塞试管中，共6份，按制备标准曲线项下操作，测得吸收值并计算含量，经计算回收率为98.22%。结果见表1。2.7精密度实验精密吸取对照品溶液0.4ml，照“2.4”项下操作，结果RSD=3.96%(n=10)。2.8样品的含量测定精密量取供试品溶液2ml共6份。按标准曲线制备相同操作，水浴挥干，分别加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，置70℃水浴加热1

6、5min，冰浴冷却后,.freell量瓶中加醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀。在560nm波长处测定吸收值,代入标准曲线方程，计算含量。结果总三萜类成分平均含量为37.93%，RSD=1.6%（n=5）。结果见表2。表1加样回收率测定结果表2含量测定结果2.9药材含量测定精密称取南蛇藤药材粉末(过40目筛)40mg，置50ml量瓶中，加入甲醇20ml，超声提取90min，滤过，用适量甲醇洗涤药渣定容至50ml，摇匀。吸取0.1ml，置10ml量瓶中，照“2.8”项下操作，代入标准曲线方程，计算含量。结果总三萜类成分平均含

7、量为12.87%，RSD=3.39%(n=5)。3讨论目前总三萜类成分的含量测定多采用重量法和比色法［7］，考虑到重量法适合对原料药材进行定量鉴别，实验操作复杂，受各种试剂的用量、反应温度、反应时间等诸多因素影响较为显著。本实验直接以甲醇作为溶剂，以醋酸乙酯制备各溶液，采用了香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法进行测定，相比其他文献报道的比色法减化了实验步骤，缩短了实验时间，同样达到很好的测定效果。实验结果表明，若反应条件控制得当，测定结果稳定，重复性好，本实验方法可作为本药材质量评估的一种检测手段。致谢：在本课题研究过

8、程中，感谢中药化学教研室朱全红教授给予的悉心指导，感谢课题组贺丰博士、辛增辉硕士给予的帮助!【