比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量

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1、比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量季春张融胡晨游文玮佟丽【摘要】目的建立南蛇藤提取物总三萜类成分的含量测定方法，为南蛇藤药材的质量控制提供依据。方法采用比色法进行测定，以齐墩果酸为对照品，样品经5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色，在560nm处测定。结果在0.42～16.8μg·ml-1范围内吸光度与含量成良好的线性关系，r=0.9993（n=7），平均加样回收率为98.22%，RSD=3.77%（n=6）。结论该法操作简便、快速、灵敏，测定结果准确、可靠，可作为南蛇藤药材的一种定量分析方法。【关键词】南蛇藤总三萜比色法　　南蛇藤Celastru

2、sorbiculatusThunb.系卫矛科(Celastraceae)南蛇藤属Celastrus藤本植物，又名过山风、黄藤、降龙草等。南蛇藤始载于清代《植物名实图考》〔1〕，其藤茎、根、叶、果实、种子均可入药，药性辛温、有小毒，功效祛风、除湿、活血、解毒、消肿，主要用于治疗筋骨疼痛、腰腿痛、风湿性关节炎、跌打损伤、痈肿疮疡等病症〔2〕。前期实验结果表明，南蛇藤提取物具有较好的抗炎镇痛作用，并对大鼠佐剂性关节炎具有较强的抑制作用〔3～5〕。为进一步控制药材质量，本实验采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法，对南蛇藤提取物中的总三萜类成分进行含量测定。

3、1仪器与材料1.1仪器HP8453紫外-可见光分光光度计（惠普公司美国），SartoriusCP225D十万分之一天平（赛多利斯有限公司德国）。1.2试剂高氯酸、冰醋酸、醋酸乙酯、甲醇、香草醛均为分析纯，由广州化学试剂公司提供；齐墩果酸对照品购于中国药品生物制品检定所(批号110709-200304)；南蛇藤从广东省药材公司购买，经南方医科大学中医药学院中药鉴定教研室马骥教授鉴定为南蛇藤CelastrusorbiculatusThunb.。2方法与结果2.1对照品溶液的配制精密称取齐墩果酸对照品10.5mg，置10ml容量瓶中用甲醇定容。再准确

4、移取2ml此溶液至10ml容量瓶中并用甲醇定容，制成0.21mg·ml-1对照品溶液。2.2供试品溶液的制备称取南蛇藤原药材1000g，用8倍量75%乙醇回流提取2h，过滤，滤渣再用5倍量75%乙醇回流提取1h，过滤，合并滤液并浓缩至每克浸膏相当于原药材2～4g。浸膏用蒸馏水洗涤，60℃恒温箱干燥24h。精密称取该干燥粉末100mg，用甲醇超声提取30min，转移至100ml容量瓶中定容。准确移取4ml至100ml容量瓶中用甲醇定容，即得浓度为0.04mg·ml-1的供试品溶液。2.3测定波长的选择取齐墩果酸对照品溶液，（空白对照为不加对照品溶

5、液用醋酸乙酯稀释至刻度的混合溶液）加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml显色〔6〕后，进行可见-紫外全波长扫描。结果表明，对照品溶液在560nm处有最大吸收峰（如图1），多次重复，峰形一致且空白对照无干扰，故选择560nm作为样品测定的波长。图1齐墩果酸可见-紫外吸收峰图2.4标准曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.02，0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8ml，水浴挥干，分别加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml〔6〕，置70℃水浴加热15min，迅速冰浴冷却后，转移至10ml的量瓶中加醋酸乙酯定容至刻度，

6、摇匀。在560nm波长处测定吸收值A，空白对照为不加对照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，用醋酸乙酯稀释至刻度的混合溶液。标准曲线：A=59.983C-0.0206，其中C为浓度(mg·ml-1)，A为吸收度。相关系数：r=0.9993，线性范围为0.42～16.8μg·ml-1。2.5稳定性实验取样品溶液，照“2.4”项下操作，每隔0.5h测定一次，前5次测定值RSD=5.16%(n=5)，结果表明，本方法在2h内基本稳定。2.6回收率实验精密称取样品4mg于100ml容量瓶中用甲醇定容，精密称取齐墩果酸对照品4m

7、g于10ml容量瓶中用甲醇定容，准确移取2ml供试品溶液和75μl对照品溶液于具塞试管中，共6份，按制备标准曲线项下操作，测得吸收值并计算含量，经计算回收率为98.22%。结果见表1。2.7精密度实验精密吸取对照品溶液0.4ml，照“2.4”项下操作，结果RSD=3.96%(n=10)。2.8样品的含量测定精密量取供试品溶液2ml共6份。按标准曲线制备相同操作，水浴挥干，分别加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，置70℃水浴加热15min，冰浴冷却后,转移至10ml量瓶中加醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀。在560nm波长处测定吸收值,代入

8、标准曲线方程，计算含量。结果总三萜类成分平均含量为37.93%，RSD=1.6%（n=5）。结果见表2。表1加样回收率测定结果表2含量测定结果2.9药