超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究

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1、超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究吕杏放朱文斌杨倬荣周杨黄春瑜彭新生【摘要】　　目的：探讨夏枯草中总三萜类成分的提取工艺。方法：采用正交试验设计方案优化夏枯草中总三萜类成分的超声提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取温度65℃，85％乙醇，超声30min，10倍溶剂用量，超声提取3次。结论：超声提取既简便又高产，节能且环保。【关键词】超声提取总三萜类夏枯草熊果酸　　夏枯草是唇形科植物夏枯草PrunellavulgarisLinn．的干燥果穗或全草，别名夏至草、夏枯头。在我国主产于江苏、浙江、安徽和济南等地，主要化学成分为三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类、糖类和挥发油类等〔1〕，具有清肝、明目、散

2、结、消肿、止痛之功效，临床用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎等疾病〔2〕。夏枯草属植物中含有多种三萜类成分,主要为齐墩果烷型、乌苏烷型和羽扇豆烷型三萜。其药理活性成分熊果酸（UA）、齐墩果酸（OA）等三萜类化合物具有镇静、抗炎、抗菌、抗高血压、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应〔3〕。近年来研究发现，三萜类中的熊果酸（UA）具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用，极有可能成为低毒高效的新型抗癌药物〔4〕；齐墩果酸（OA）具有保肝、免疫作用〔5〕。本实验采用正交试验设计，以夏枯草中总三萜类成分的含量为评价指标，考察乙醇为溶剂

3、用超声提取的最佳工艺条件。　　1仪器与试药　　KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-1800紫外-可见分光光度仪（上海美谱达仪器厂）；TGL-18G高速台式离心机（湖南星科科学仪器公司）；l）超声溶解，过滤，加活性炭脱色并于70℃水浴15min，趁热过滤，加无水乙醇定容至25ml,取10ml样品溶液离心（4000r/min,20min）。离心后取上层澄清液5ml于25ml容量瓶，加无水乙醇定容至刻度，作为供试液备用。　　2.2测量方法的研究　　2.2.1对照品溶液的制备准确称取熊果酸标准品20.00mg至容量瓶中，用无水乙醇配成浓度为80.00g／ml的对照品溶

4、液。　　2.2.2选择显色条件采用L9（34）正交表设计正交试验：0.30ml、0.40ml、0.50ml的5％香草醛-冰醋酸（A）；0.80ml、1.00ml、1.20ml的高氯酸（B）；50.0℃、60.0℃、70.0℃的水浴温度（C）；10.0min、15.0min、20.0min水浴时间（D）。用对照品溶液显色，以吸收度数值为检测指标，得出最佳显色条件为：5.0％香草醛-冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸1.00ml，60℃水浴10min。　　2.2.3最大吸收波长的选择精密吸取1.00ml熊果酸对照品溶液，用最佳显色条件显色。对显色体系在500nm～600nm波长范围内扫描，结果表明：

5、在546nm处显示最大吸收，且空白无干扰，故选546nm为测定波长。　　2.3方法学考察〔6，7〕及含量测定　　2.3.1线性关系考察精密吸取熊果酸对照品溶液（80.00g／ml）0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00、1.10ml置带塞刻度试管中，100℃水浴挥干溶剂，加5.0％香草醛-冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸1.00ml，60℃水浴10min，冰浴冷却，加冰醋酸5.00ml，摇匀，在546nm处测定吸收值，以熊果酸的微克数为横坐标，吸收度测定值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析。　　2.3.2稳定性考察精密吸取熊果酸对照品溶液0.60ml，浓度为80.00g

6、／ml。在显色冰浴冷却后开始计时，于20min～80min分钟内测定。　　2.3.3重现性考察精确称取干燥至恒重的夏枯草粗粉5份，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度。　　2.3.4含量测定精确称取干燥至恒重的夏枯草粗粉3份，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度。以吸收度值为考察指标，计算药材中总三萜类成分的含量。　　2.3.5回收率试验分别精密吸取熊果酸对照品溶液（80.00g／ml）置5支带塞刻度试管中，各0.50ml，各精确加入称取的干燥至恒重夏枯草粗粉，然后按2.1.3项下方法平行操作，按最佳显色条件

7、显色，于稳定范围内测定吸收度，按标准曲线进行测定分析。　　2.4结果　　2.4.1线性关系考察结果　　回归方程为：y＝0.0058x＋0.0099，R2＝0.9936，在39.33g～86.22g范围内呈良好线性关系。　　2.4.2稳定性考察结果　　稳定性考察结果为在显色后30至60min内稳定，见表2。　　表2稳定性考察表（略）　　2.4.3重现性考察结果　　重现性考察得样品平均浓度为56.15g／ml，R