氧耗剂致乳鼠心肌缺氧-复氧模型的建立论文

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1、氧耗剂致乳鼠心肌缺氧/复氧模型的建立论文余薇，许波，彭彦，吴基良，李璐【摘要】目的探讨利用氧耗剂建立乳鼠心肌缺氧/复氧损伤模型的一种新方法。方法取SD乳鼠原代心肌细胞培养，观察氧耗剂连二亚硫酸钠不同浓度(1，2，3.freelmol/L)分别缺糖缺氧1h复氧24h及在4mmol/L浓度下缺糖缺氧不同时间(5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h)后复氧24h对心肌细胞存活率及培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的影响，并进行细胞形态学观察。结果乳鼠心肌细胞经过缺氧/复氧处理后，与正常对照组相比，连二亚硫酸

2、钠可呈浓度依赖性降低心肌细胞存活率，尤其Na2S2O4浓度大于3mmol/L时细胞MTT的OD值与正常对照组有显著性差异，同时上清液中LDH含量升高，差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。而当连二亚硫酸钠4mmol/L浓度下随着缺氧时间延长，细胞的存活率显著降低，而心肌细胞上清液中LDH的释放量显著升高，差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)，呈现时间依赖性。结论应用连二亚硫酸钠可建立心肌细胞缺氧再灌注损伤模型。【关键词】心肌细胞;缺氧;复氧;细胞模型;连二亚硫酸钠Abstract：ObjectiveT

3、oestablishhypoxia/reoxygenationmodelinneonatalratcardiomyocytesbyoxygenagent.MethodsCultivateneonatalratcardiomyocytes,observetheapoptoticcardiacmyocytebyusingMTTassayandafterbeinggivenNa2S2O4mol)for1handthenreoxygenationfor24h;besidesgiveNa2S2O4mol/Latdifferen

4、ttime(5,15,30min,1,2,4,6h)andthenreoxygenatiefor24h.Biochemicalmethodinelactatedehydrogenase(LDH)activity.ResultsNa2S2O4couldincreasecellapoptosisandtheleveloflacatedehydrogenase(LDH)thesupernatantfluid.ConclusionItisaneffectivehypoxia/reoxygenationmodeofusingN

5、a2S2O4inneonatalratcardiomyocytes.Keyode;Na2S2O4心肌缺血/再灌注损伤是临床常见的病理过程，探讨其发病机制并寻找有效的防治措施是目前医学研究领域的一项重要内容。制备离体乳鼠心肌局部缺血/再灌注模型是进行相关研究的常用方法。因此，制备简便易行、稳定可靠的缺血/再灌注模型具有重要的实用价值1。鉴于以上原因，本文通过氧耗剂连二亚硫酸钠致心肌缺氧的最佳浓度和时间寻求制备一种稳定简便的心肌缺氧再复氧模型。1材料与仪器1.1动物SpragueDae-thylthiaml-2y1)-2

6、,5-diphenylterazoliumbromide，MTT)(sigma公司;胰酶(1∶250Amresco公司);胎牛血清(浙江杭州四季青公司);DMEM培养基(GIBCO);5-溴脱氧尿嘧啶(SIGMA);乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。1.3主要器材ALE-200型电子分析天平(湘仪天平仪器厂);YXJ-1型离心机(SIGMA);CO2培养箱(HERAEUS);酶标仪(MAGELLAN);CKX41型倒置显微镜(OLYMPUS)。2方法2.1心肌细胞培养2,3将含10%胎牛血清的DM

7、EM培养基无菌分装，预先置于37℃，5%CO2培养箱中温育饱和。取新生Sprague-Dam×1mm×1mm大小的碎片，加入适量的0.1%胰蛋白酶，置37℃水浴中振荡10min消化，去上清，沉淀继续用0.1%胰酶37℃水浴，分次消化并经200目一次性筛网过滤成单细胞悬液后，加入血清培养基终止消化后1500r/min离心5min，收集沉淀，加入含5-溴脱氧尿嘧啶的正常培养液于37℃，5%CO2饱和湿度条件下差速贴壁2h后，调整细胞浓度至(1~5)×106/L，每孔300μl接种到96孔培养板上，置入37℃，5%CO2饱

8、和湿度培养箱中继续培养，于接种48h后换正常培养基继续培养。2.2连二亚硫酸钠缺氧复氧模型制备2.2.1不同浓度连二亚硫酸钠对心肌细胞的影响取培养4d的心肌细胞，随机分为8组，每组12孔：①正常对照组，用高糖DMEM孵育;②单无糖Earle'S液组;③连二亚硫酸钠1，2，3，4，5，6mmol/L+无糖Earle'S液组;置37℃，5%CO2中