瘦素对肝细胞三酰甘油沉积的影响

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1、瘦素对肝细胞三酰甘油沉积的影响【摘要】目的观察瘦素对人L02脂肪变肝细胞三酰甘油(TG)沉积的影响，探讨瘦素在非乙醇性脂肪性肝病发生、发展中的作用。方法人肝L02细胞培养接种于50ml培养瓶中，用50%胎牛血清1640培养基造模，时间24h。设立正常组、模型组、瘦素处理1，2，3组，处理组瘦素浓度分别为10-7mol/L，10-6mol/L，10-5mol/L，分别处理6h；再以10-6mol/L浓度瘦素建立时效关系分别处理（6，12及24h）。每组均行油红“O”染色观察脂肪化情况，高效液相色谱测

2、细胞内TG含量变化。结果油红“O”染色显示50%的胎牛血清的1640培养基24h能成功地制造肝细胞脂肪变性模型，加入瘦素处理后脂肪化程度减轻。高效液相色谱显示细胞内TG明显减少，且与瘦素呈剂量、时间依赖性关系。结论肝细胞脂肪变性时，瘦素能使肝细胞脂肪化程度减轻，能减少肝细胞TG的沉积,对脂肪肝防治有一定的作用。【关键词】脂肪变肝细胞；瘦素；三酰甘油　　EffectsofLeptinonDispositionofTriglycerideinFattyLiverCells　　ZhouHongyu,Yan

3、gXuefeng　　(DepartmentofGastroenterology,SecondAffiliatedHospital,NanhuaUniversity,Hengyang421001,China)　　Abstract：ObjectiveToexploretheeffectofleptinontriglyceride'sdispositioninnormalandnonalcoholicinducedfattylivercell.MethodsL02livercellslculturedi

4、sh.Fattylivercellmodelsadebryobloodserumfor24hours.ResultsOilredstainingshobryobloodserumcanmakefattylivercellmodel.AfterL02livercellsodelgroup'striglyceridedispositionincreasedclearly,butafterleptinodelcells,triglyceride'sdispositiondecreasedobviously

5、,etherapeuticeffectonfattylivercells.　　Keya），1，2，4丁三醇（Buches瑞士），油红“O”（北京生物化学有限公司），正己烷、异丙醇、乙腈（国产分析物）。二氧化碳恒温培养箱（日本SANYO公司），超净工作台（德国Heraeus公司），倒置相差显微镜(OLYMPUS)，50ml培养瓶，24孔细胞培养板(NUNC公司)，酶标分析仪（美国BioRad550）。　　12实验方法　　12.1非乙醇性脂肪变肝细胞模型的建立　　人肝L02细胞株培养接种于50ml

6、培养瓶中，在含体积分数10%的灭活胎牛血清、100U/ml青霉素和100mg/L链霉素的1640完全培养基中，于37℃，5%二氧化碳培养，饱和湿度，贴壁生长，待细胞长满80%瓶底，消化液消化传代。在更换新鲜培养液后加入胎牛血清，使其浓度为50%，继续培养24h，即形成非乙醇性肝细胞脂肪变性模型。设正常组、模型组、瘦素处理1，2，3组，瘦素处理组的瘦素浓度分别为10-7mol/L，10-6mol/L，10-5mol/L，分别处理6h；再以10-6mol/L浓度瘦素建立6，12，24h的时效关系分别处理。

7、每组均行油红“O”染色观察脂肪化情况，高效液相色谱测细胞内TG含量变化。　　1.2.2油红“O”染色观察造模是否成功　　采用Lillie氏油红“Ｏ”染色法：将细胞培养于放有无菌盖玻片的6孔培养板，用PBS冲洗盖玻片3次，每次5min，50%异丙醇固定1min，油红“O”染色液染色10min，蒸馏水冲洗3次，每次1min，苏木素染色5min，分色和返蓝后，HPIAS1000型图像分析系统收集图像。按，流速0.7ml/min，采用梯度洗脱A：乙腈B：水0~12min：75%A~95%A：121min~1

8、8min：75%A。将标准溶液浓度对甘油/内标峰面积比值线性回归后得回归方程用于样品甘油浓度的计算。TG的浓度为总甘油浓度游离甘油浓度。　　1.3统计学方法　　统计分析用SPSS软件，实验数据用均数±标准差（±s）表示，两组数据资料比较用t检验及方差分析，P<0．05为有显著性差异。　　2结果　　21人肝L02细胞脂肪化　　正常细胞用50%胎牛血清培养基培养24h后，用油红“O”染色，显微镜下观察，细胞浆内有大量脂滴存在，符合脂肪化肝细胞特点