老年人龋坏组织中变形链球菌和乳酸杆菌的致龋特点

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1、老年人龋坏组织中变形链球菌和乳酸杆菌的致龋特点作者：周建业张金婷肖云车团结何祥一【摘要】目的探讨老年人龋坏组织中变形链球菌（MS）和乳酸杆菌（LB）在致龋过程中的特点。方法136例龋坏组织样本按患者年龄、患牙龋坏程度和龋坏活跃性分组，利用选择性培养基对MS及LB行分离、培养和鉴定。统计两种细菌在不同组别中细菌菌落形成单位（CFU）计数及两种细菌致龋样本例数。结果在老年龋组、严重龋组（中、深龋）和活动期龋组中，MS与LB的CFU计数均显著升高(均P＜0.05)；MS与LB共同致龋样本数在老年龋组中显著升高(P＜0.05)，并随龋坏程度的加重而升高(

2、P＜0.05)。结论在老年龋病及中、深龋中，MS与LB为互生关系，有明显共同致龋作用。【关键词】变形链球菌；乳酸杆菌；老年人；龋坏组织变形链球菌（MS）和乳酸杆菌（LB）与龋病的形成和发展密切相关。MS是口腔主要致龋菌，对其在细菌毒力、致龋机制方面已有研究〔1〕，而有关LB的致龋作用颇有争议，有学者认为LB是龋坏的结果而不是龋坏的原因〔2〕；另有研究认为在致龋初期LB并不致龋，而在龋坏进入深层时，LB由于其较强的耐酸性而大量繁殖并产酸，协同MS致龋〔3〕；有人指出LB有可能因抑制龋病病原菌的繁殖而抑制龋病的发展〔4～5〕。本研究通过分离、培养及鉴

3、定136例龋坏组织样本中的MS和LB，探讨MS与LB的致龋特点及老年龋病患者龋坏组织中的菌与龋病严重程度的关系。1材料与方法1.1细菌培养基与鉴定方法细菌培养基采用改良轻唾琼脂培养基(MS)〔6〕与Rogasa培养基(LB)〔7〕，分别采用DentocultSM法和DentocultLB法鉴别MS和LB致龋活跃性。1.2方法1.2.1采样及样本分组龋坏组织样本，由同一操作者于2006年11月～2007年3月在本院、甘肃省第二人民医院及兰州军区总医院口腔科的90位患者（136颗患牙）采集，每患牙采集1例样本，共取样本136例。研究对象无系统疾病，采

4、样前2l灭菌生理盐水1.5ml离心管及1＃挖器（Q/ILLS0022001），常规无菌操作采样。采样过程如下：先将挖器前端置酒精灯外焰烧灼灭菌（3次，6～7s/次），将取样部位进行冲洗、隔湿、干燥，然后刮取龋坏组织至平1＃挖器勺部。将所取样本浸入离心管液体中，轻摇、混匀。将离心管标号，2h内送检。所剩样本加300μl80%甘油，冻存备用（-20℃）。将样本按照年龄分为老年组（年龄≥60岁）、恒牙组（年龄12～59岁）和乳和替牙组（年龄≤13岁）；按龋坏程度分为浅龋、中龋和深龋组；按龋病活跃性分为活动期组和静止期组。1.2.2细菌接种及孵化将样本

5、混匀后，分别取20μl接种于两种培养皿，20%O2、80%CO2、37℃恒温条件下培养48h。1.2.3细菌形态学及专用培养基鉴定MS菌落为透明、边缘略整齐、中心微隆起似雨滴状菌落；LB菌落乳白色、边缘略不整齐、中心微隆起菌落。随机法，将本实验分离获得的两种细菌分别二次克隆后接种于DentocultSM与DentocultLB上培养，生长良好,证明本实验培养两种菌为目的菌。1.2.4菌落计数136例样本中，共120例检出MS和(或)LB，对两种培养皿中菌落行盲法计数(每皿计数3次，最后取均数)。本实验设定：如MS的CFU计数对数值≥MS的CFU计

6、数对数值的单侧90%下限值〔P10(MS)〕，且LB的CFU计数对数值＜LB的CFU计数对数值的单侧90%下限值〔P10(LB)〕，则该样本所对应病例中MS为主要致龋细菌；如MS的CFU计数对数值＜P10(MS)，且LB的CFU计数对数值≥P10(LB)，则该样本所对应病例中LB为主要致龋细菌；如MS的CFU计数对数值≥P10(MS)，且LB的CFU计数对数值≥P10(LB)，则该样本所对应病例中MS与LB共同致龋。如MS的CFU计数对数值＜P10(MS)，且LB的CFU计数对数值＜P10(LB)，则该样本不进入细菌相关致龋病例数统计。1.3统计

7、学处理MS和LB的CFU计数因频数分布呈偏态分布，经对数转换后呈正态分布(区间宽度0.25)，其组间比较采用方差分析。利用公式1.282s计算P10(MS)和P10(LB)。计数资料组间比较采用χ2检验。2结果2.1MS和LB的CFU计数对数值MS的CFU计数对数值为4.5712±0.7228；LB的CFU计数对数值为4.4756±0.7419。计算P10(MS)为3.644，P10(LB)为3.524。在本实验中有10例MS的CFU计数对数值＜P10(MS)，且LB的CFU计数对数值＜P10(LB)，因而不同细菌相关致龋病例数为110。2.2

8、不同组别中CFU计数均数对数值比较各年龄组别中，老年组两种细菌CFU计数均数对数值均升高(P＜0.05)（表1）；不同龋坏程度组中，MS