国产水溶性蜂胶对主要致龋链球菌及其耐氟菌株致龋性的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文国产水溶性蜂胶对主要致龋链球菌及其耐氟菌株致龋性的影响姓名：彭志庆申请学位级别：硕士专业：口腔基础医学指导教师：林居红20100501重庆医科大学硕士研究生学位论文国产水溶性蜂胶对主要致龋链球菌及其耐氟菌株致龋性的影响摘要背景：龋病是一种慢性非传染性疾病，是人类的常见病及多发病之一，严重影响着人们的健康。龋病是在以细菌为主的多因素影响下，牙体硬组织发生慢性进行性破坏的一种疾病，细菌是龋病发生的最关键因素，其中变形链球菌(S．mutans)血清c型和远缘链球菌(S．sobrinus)血清g型是与人类龋病密切相关的重要致龋菌。葡糖基转移酶(GTF)

2、在口腔细菌粘附和牙菌斑形成的过程中起重要作用，是变形链球菌群致龋的主要毒力因子之一，是细菌致龋的必备条件和物质基础。目前龋病的防治研究主要围绕链球菌在牙面的粘附、聚集及增殖等几个环节进行，其中细菌增殖方面的防龋研究主要集中在抗菌制剂抑制细菌生长方面，葡糖基转移酶在细菌粘附方面起重要作用。国内外已经有大量有关防龋药物的研究。其中氟的防龋效果已经得到研究证实，但是氟化物的广泛应用，使其产生一些致龋的耐氟菌株，增加了防龋难度。因此寻求新的安全有效的防龋药物成为研究的热点。蜂胶(propolis)是一种具有粘性和芳香性的固体胶状物质，具有广泛的生物学活性和药理学作用，有研究已

3、证实蜂胶对口腔常见致病1重庆市自然科学基金(CSCT2007BB5275)2重庆医科大学硕士研究生学位论文菌有较强的抑制作用。尽管国内外对蜂胶做了大量的研究，但是目前还没有关于蜂胶对主要致龋链球菌耐氟菌株的生长抑制作用及对GTF酶活性影响等相关的研究报道；且蜂胶来源、产地及提取工艺不同，在其成分及抗菌活性上会有所差别。因此本实验选择了国产水溶性蜂胶，测定国产水溶性蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株的生长抑制作用、葡糖基转移酶的活性影响。目的：本研究将借鉴国内、外研究成果，测定国产水溶性蜂胶对主要致龋链球菌亲代菌株及其耐氟菌株的生长抑制作用、葡糖基转移酶(G

4、TF)活性的影响，进一步证实蜂胶作为天然药物防龋的有效性，并为国产蜂胶的开发利用提供一定的理论依据。材料与方法：1．氟化钠最小抑菌浓度(MIC)递增法体外诱导耐氟菌株。将冻干保存的菌种变形链球菌(S聊)和远缘链球菌(SJ)接种于BHI血琼脂培养基中，37。C微需氧活化培养48h(900ml／LN2，100ml／LC02)，经革兰染色镜检及生化鉴定为变形链球菌和远缘链球菌纯培养后，采用液体稀释法测定对氟化钠的敏感性。取S．m和＆s单菌落接种于TSA上37。C微需氧活化培养48h，刮取菌苔涂布于含NaF的TSA上，其氟化钠含量分别为600、650、700、750、800、

5、850、900、950、1000mg／L(S聊)：300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000mg／L(Ss)，逐步诱导产生耐氟菌株。将其在不含NaF的TSA上连续传代20次后，3重庆医科大学硕士研究生学位论文再接种于含1000mg／LNaF的TSA上37。C培养，产生＆聊和Ss耐氟菌株(S朋．FR、S．s．FR)。进行革兰染色镜检及生化鉴定后，冷冻保存。2．蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌及其耐氟菌株的体外抑菌实验。将过滤除菌的lOOg／L的蜂胶溶液配制成259,，L的蜂胶TSA液，采用倍比稀释

6、法将蜂胶配制成不同的浓度，最高浓度为259／L，最低浓度为O．109／L，共9个浓度，每支试管分装成lml；采用麦氏比浊法用TSA液体培养基将4种细菌配成细菌混悬液1．5x106CFU／ml，分别取O．05ml菌液加入1Ⅱll含不同浓度蜂胶的TSA中，37。C微需氧活化培养48h(900ml／LN2，100ml／LC02)，观察结果，实验管呈现澄明，摇匀后仍澄明者，认为该管无菌生长，从无菌生长的各管中找出最低药物浓度的实验管，该管的药物浓度即为最小抑菌浓度(MIC)。然后，将未见细菌生长的各管培养物各取一接种环涂布在TSA琼脂培养基中，37℃微需氧活化培养48h(90

7、0rrd／L1',12，100ml／LCOs)，平板上无菌落生长的最小稀释度的药物浓度即为最小杀菌浓度(ⅧC)。每一菌株的测定均重复3次，取MIC、MBC均值。设立阴性对照组和阳性对照组。3．蜂胶对S．m、S．m-FR、S．s、S．s-FR葡糖基转移酶的影响。将1009／L的蜂胶溶液用双蒸水将其稀释成6．25、3．13、1．56、O．78、O．399／L共5个浓度以备用。将冷冻保存的菌种S．m、S．m．FR、S．s、S．s-FR微需氧活化培养48h经鉴定后，采用麦氏比浊法将4种细菌配成1．5x108CFU／ml，各取5ml菌液分别接种子50ml含10