no和inos在大鼠糖尿病早期肾脏中的变化论文

《no和inos在大鼠糖尿病早期肾脏中的变化论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、NO和iNOS在大鼠糖尿病早期肾脏中的变化论文【摘要】目的：观察糖尿病大鼠早期肾脏中一氧化氮（Nitricoxide，NO）含量和诱导型一氧化氮合酶（Induciblenitricoxidesynthase，iNOS）活性变化，探讨NO/iNOS在糖尿病早期肾脏损害中的作用机制。方法：取成年健康SD大鼠60只，随机分成糖尿病组（DM组）和正常对照组（NC组）,每组30只。DM组大鼠采用一次性腹腔内注射STZ制造糖尿病大鼠模型，成模后和NC组分别于第1、2、4周麻醉取左肾，用硝酸还原酶法和吸光光度法测定肾组织中NO含量、一氧化氮合酶（nitricoxi

2、desynthase，NOS）和iNOS活性。所有数据用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。结果：①DM组大鼠肾组织中NO含量、NOS和iNOS活性分别较同批NC组有显著性差异（P0.05）；②各组大鼠中NO含量与NOS活性、iNOS活性呈正相关。结论：糖尿病大鼠早期肾脏中iNOS活性增强.freela公司；NO测试盒（A012）、NOS组织试剂盒和iNOS组织试剂盒均购于南京建成生物工程研究所；其它试剂均为国产分析纯。12主要仪器TGLL18G台式高速冷冻离心机（江苏泰昌公司）；UV751GD紫外/可见分光光度计（上海）；DY89Ⅰ型电动

3、玻璃匀浆机（宁波新芝科器研究所）；SHZ88水浴恒温振荡器（江苏金坛）。13实验动物成年健康SD大鼠60只，雌雄不限，体重200～220g（由辽宁医学院实验动物中心提供）。2方法21动物模型的建立取上述SD大鼠60只，随机分成正常对照组（NC组）和糖尿病组（DM组），每组30只。标准颗粒饲料喂养，不限食水。室内通风良好，相对湿度40%～70%，室温18℃～22℃。DM组大鼠按50mg/kg体重一次性腹腔注射STZ溶液，同时，NC组一次性腹腔注射等体积生理盐水，连续监测鼠尾血糖3d，持续血糖浓度13.8mmol/L者，确定为糖尿病模型。此后定期监

4、测鼠尾血糖。22肾组织匀浆制备DM组大鼠成模后，与NC组大鼠分别于成模后第l、2、4周取右肾，沿横轴切割组织块约0.2g～1g，入冰生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸滤干，称重后放入5ml烧杯内。用移液管取总量生理盐水（生理盐水体积总量应该是组织块重量的9倍）于烧杯中，用眼科小剪剪碎组织块（烧杯放入冰水中进行）。用组织捣碎机10000~15000rpm上下研磨制成10%肾组织匀浆（匀浆时间每次10s，间隙30s，连续3～5次，在冰水中进行）。23肾组织NO含量、NOS和iNOS活性测定231肾组织蛋白含量测定将上述10%肾组织匀浆静置30min，

5、冷冻离心机（3000rpm）离心10min，留取上清液。按照蛋白含量测定说明书加入试剂，利用UV751GD紫外/可见分光光度计（选取595nm，1cm光径）测量各样本吸光度值（OD值1），代入以下公式，计算出肾组织蛋白含量。蛋白含量（g/L）＝测量管OD值1标准管OD值1×标准管浓度（g/L）232肾组织NO含量测定按照NO测试盒说明书加入试剂，再利用UV751GD紫外/可见分光光度计（选取550nm，0.5cm光径）测量各样本吸光度值（OD值2），与测得的各样本蛋白含量代入以下公式，计算出肾组织NO含量。NO含量（μmol/gprot）=测量管

6、OD值2-空白管OD值2标准管OD值2-空白管OD值2×标准品浓度(20μmol/L)／样本的蛋白含量(gprot/L)233肾组织NOS活性测定按照NOS组织试剂盒说明书加入试剂，利用UV751GD紫外/可见分光光度计（选取530nm，1cm光径）测量各样本吸光度值（OD值3），与测得的各样本蛋白含量代入以下公式，计算出肾组织NOS活性。NOS活性（U/mgprot）=NOS测定管OD值3-空白管OD值3呈色物纳摩尔消光系数×反应液总体积取样量×1比色光径×反应时间／蛋白含量(mgprot/L)234肾组织iNOS活性测定按照iNOS组织试

7、剂盒说明书加入试剂，利用UV751GD紫外/可见分光光度计（选取530nm，1cm光径）测量各样本吸光度值（OD值4），与测得的各样本蛋白含量代入以下公式，计算出iNOS活性。iNOS活性（U/mgprot）=iNOS测定管OD值4-空白管OD值4呈色物纳摩尔消光系数×反应液总体积取样量×1比色光径×反应时间／蛋白含量(mgprot/L)以上3项生化指标具体操作均按说明书进行。24统计处理所有统计资料用均数±标准差（±s）表示。应用SPSS11.5统计软件包进行统计分析。统计方法：DM组与NC组大鼠之间采用配对t检验；DM组大鼠各病程之间采用单因素

8、方差分析，并进行q检验；NO与iNOS活性、NOS活性间进行相关分析。所有资料在分析之前进行方差齐性检验。3