脐带血用于血友病a产前诊断的研究论文

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1、脐带血用于血友病A产前诊断的研究论文张雪芹陈会昌李文超滕彬张萍【关键词】血友病A【摘要】目的探讨应用脐带血对血友病A（HA）进行产前诊断的可行性及准确性。方法24例HA携带者妊娠20～２４周时在超声引导下抽取脐血，用一期法检测孕妇外周血及胎儿脐血FVⅢ：Ｃ，用ELISA方法检测FVⅢ：ＣＡｇ及ｖＷＦ；应用LDＰＣＲ技术对携带者及其胎儿进行内含子22倒位检测，对非倒位者应用Bｃ１ⅠPCR／ＲＦＬＰ分析技术进行间接基因诊断。结果24例携带者血浆FVⅢ：Ｃ，ＦＶⅢ：ＣＡｇ及ｖＷＦ分别为36％～１５０％(平均79%±２２％)，90%～１３２％(平均102%±１８％），92％～１４１％(平均107

2、%±１６％）；２４例胎儿血浆FVⅢ：Ｃ，ＦＶⅢ：ＣＡｇ及ｖＷＦ分别为09％～９０％(平均417%±２５％）.freelophiliaAprenataldiagnosisbyfetalbloodsampling.ＭethodsＣordocentesisedin24pregnanthemophiliaAcarriersduring20~２４ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｗｅｅｋｓ．ＴｈｅｐｌａｓｍａｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒⅧactivity(FVⅢ：Ｃ）ofcarrier’speripheralbloodandfetusumbilicalbloodinedbylongdistancepol

3、ymerasechainreaction,indirectlygenediagnosisethodinprenataldiagnosisofhemophiliaAtodetectFVⅢ：Ｃoffetusesumbilicalblood.ThetechnologyofLDＰＣＲandBclⅠPCR/RFLPcanimprovethedetectionofhemophiliaAcarrier.【ＫeyophiliaA，prenataldiagnosis，cordocentesis血友病A(HA)是一种最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病，其病因是由于凝血因子Ⅷ基因缺陷所致的凝血因子量的缺乏或质

4、的异常，在男性中发病率为1／５０００［１］。患者需终生输注凝血因子Ⅷ(FVⅢ）制剂治疗和预防出血，给社会和家庭带来沉重的经济负担。由于目前缺乏对此病的根治措施，故致病基因携带者检测与产前诊断，是降低发病率、提高人口质素质的有效手段。通过产前诊断的方法，可以避免HA患儿或携带者出生，达到从源头上控制HA的目的。近年来，我们和山东省立医院妇产科合作应用脐带穿刺术抽取脐血对24名血友病A携带者进行了产前诊断，取得了较好的效果，现报告如下。１临床资料１．１一般资料24例HA携带者来自河北、山东、河南等省的16个HA家系，经遗传学分析肯定携带者11人，可能携带者13人，家族先证者由本中心及其他省级

5、医院按HA诊断标准进行确诊［2］，其中重型HA家系7例，中型9例。１．２血样采集HA携带者妊娠20～２４周时，用PTC穿刺针在带穿刺支架超声探头引导下经孕妇腹壁抽取胎儿脐血18ｍｌ，加入含38％枸缘酸钠02ｍｌ的离心管内，充分混匀，2400ｒ／ｍｉｎ离心20min，取上层2／３血浆供FVⅢ：C、ＦＶⅢ：ＣＡｇ和ｖＷＦ检测，用白细胞层抽取DNA供基因诊断，同时抽取孕妇和丈夫的外周静脉血按上述方法收集血浆和抽取DNA。１．3实验方法１．３．１主要仪器：德国BE公司THROMBOTIMER半自动血凝仪，瑞士产FAME全自动酶免分析仪，美国PerkinElmer公司的PE2400ＰＣＲ扩增仪，美

6、国贝克曼低温高速离心机，美国ALT超4型B超诊断仪，日本产经皮经肝胆管造影用B型穿刺针(简称PTC针)。１．３．２主要方法和试剂：用国际通用的一期法检测血浆FVⅢ：Ｃ，试剂盒购自美国太平洋公司和爱尔兰TrinityBiotech公司，质控血浆购自中国生物药品研究所；用ELISA方法检测FVⅢ：ＣAｇ和v］．第2版.上海：上海科学技术出版社，１９９６.２８３７．刘敬忠，梁燕，朱春江，等．联合运用四种技术进行血友病A的基因诊断［Ｊ］．中华医学杂志，2001，12：722８．陈云第，王寅文，吴竟生，等．因子Ⅷ倒位的检测与血友病甲的分子诊断［Ｊ］．中华血液学杂志，1995，16：451９．Ｌak

7、chD,KazazionHH,AntonarakisSE,etal．inversionsdisruptingthefactorⅧgeneareamoncauseofseverehemophiliaA［Ｊ］．NatGe,1993,5:236１０．Gitscher,DraynaD,TuddenhamEGD,etal.GeicmappinganddiagnosisofhemophiliaAachievedthroughaBCLIpolym