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时间:2018-11-19
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1、脐带血用于血友病A产前诊断的研究论文张雪芹陈会昌李文超滕彬张萍【关键词】血友病A【摘要】目的探讨应用脐带血对血友病A(HA)进行产前诊断的可行性及准确性。方法24例HA携带者妊娠20~24周时在超声引导下抽取脐血,用一期法检测孕妇外周血及胎儿脐血FVⅢ:C,用ELISA方法检测FVⅢ:CAg及vWF;应用LDPCR技术对携带者及其胎儿进行内含子22倒位检测,对非倒位者应用Bc1ⅠPCR/RFLP分析技术进行间接基因诊断。结果24例携带者血浆FVⅢ:C,FVⅢ:CAg及vWF分别为36%~150%(平均79%±22%),90%~132%(平均102%±18%),92%~141%(平均107
2、%±16%);24例胎儿血浆FVⅢ:C,FVⅢ:CAg及vWF分别为09%~90%(平均417%±25%).freelophiliaAprenataldiagnosisbyfetalbloodsampling.MethodsCordocentesisedin24pregnanthemophiliaAcarriersduring20~24gestationalweeks.TheplasmacoagulationfactorⅧactivity(FVⅢ:C)ofcarrier’speripheralbloodandfetusumbilicalbloodinedbylongdistancepol
3、ymerasechainreaction,indirectlygenediagnosisethodinprenataldiagnosisofhemophiliaAtodetectFVⅢ:Coffetusesumbilicalblood.ThetechnologyofLDPCRandBclⅠPCR/RFLPcanimprovethedetectionofhemophiliaAcarrier.【KeyophiliaA,prenataldiagnosis,cordocentesis血友病A(HA)是一种最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病,其病因是由于凝血因子Ⅷ基因缺陷所致的凝血因子量的缺乏或质
4、的异常,在男性中发病率为1/5000[1]。患者需终生输注凝血因子Ⅷ(FVⅢ)制剂治疗和预防出血,给社会和家庭带来沉重的经济负担。由于目前缺乏对此病的根治措施,故致病基因携带者检测与产前诊断,是降低发病率、提高人口质素质的有效手段。通过产前诊断的方法,可以避免HA患儿或携带者出生,达到从源头上控制HA的目的。近年来,我们和山东省立医院妇产科合作应用脐带穿刺术抽取脐血对24名血友病A携带者进行了产前诊断,取得了较好的效果,现报告如下。1临床资料1.1一般资料24例HA携带者来自河北、山东、河南等省的16个HA家系,经遗传学分析肯定携带者11人,可能携带者13人,家族先证者由本中心及其他省级
5、医院按HA诊断标准进行确诊[2],其中重型HA家系7例,中型9例。1.2血样采集HA携带者妊娠20~24周时,用PTC穿刺针在带穿刺支架超声探头引导下经孕妇腹壁抽取胎儿脐血18ml,加入含38%枸缘酸钠02ml的离心管内,充分混匀,2400r/min离心20min,取上层2/3血浆供FVⅢ:C、FVⅢ:CAg和vWF检测,用白细胞层抽取DNA供基因诊断,同时抽取孕妇和丈夫的外周静脉血按上述方法收集血浆和抽取DNA。1.3实验方法1.3.1主要仪器:德国BE公司THROMBOTIMER半自动血凝仪,瑞士产FAME全自动酶免分析仪,美国PerkinElmer公司的PE2400PCR扩增仪,美
6、国贝克曼低温高速离心机,美国ALT超4型B超诊断仪,日本产经皮经肝胆管造影用B型穿刺针(简称PTC针)。1.3.2主要方法和试剂:用国际通用的一期法检测血浆FVⅢ:C,试剂盒购自美国太平洋公司和爱尔兰TrinityBiotech公司,质控血浆购自中国生物药品研究所;用ELISA方法检测FVⅢ:CAg和v].第2版.上海:上海科学技术出版社,1996.2837.刘敬忠,梁燕,朱春江,等.联合运用四种技术进行血友病A的基因诊断[J].中华医学杂志,2001,12:7228.陈云第,王寅文,吴竟生,等.因子Ⅷ倒位的检测与血友病甲的分子诊断[J].中华血液学杂志,1995,16:4519.Lak
7、chD,KazazionHH,AntonarakisSE,etal.inversionsdisruptingthefactorⅧgeneareamoncauseofseverehemophiliaA[J].NatGe,1993,5:23610.Gitscher,DraynaD,TuddenhamEGD,etal.GeicmappinganddiagnosisofhemophiliaAachievedthroughaBCLIpolym
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