血友病研究的进展课件

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1、血友病研究的进展安徽省立医院血液科吴竞生血友病是由于遗传性凝血因子VIII（FVIII）和IX（FIX）基因缺陷，造成血浆FVIII和FIX含量不足或功能缺陷，引起的一组终生出血的凝血障碍性疾病，包括血友病A（FVIII缺乏）和血友病B（FIX缺乏），属X性联隐性遗传疾病。西方国家血友病患病率为5-10/10万人口，我国2.73/10万人口。版权归原作者所有晋升网整理推荐血友病治疗进展70年代-有效替代治疗，致残率与死亡率，寿命由平均10岁接近正常。80年代-病毒灭活技术改进，替代治疗安全性，感染病毒性肝炎，爱滋病。90年代-重组凝血因子广泛应用，提

2、高疗效；避免抗体产生与易发生病毒感染的副作用。基因治疗在动物试验中获得成功,在人类的临床初步研究成果为血友病的根治带来曙光。如何进一步降低血友病患者的死亡率，致残率，出生率，提高患者生存质量是目前工作的重要任务。一．发病机制的研究FVIII基因定位于Xq28，全长186kb，由26个外显子和25个内含子组成。已发现约300多种基因突变，基因型与表型密切相关。点突变，小的基因缺失引起轻度FVIII缺乏。终止密码子，大的基因缺失，插入，移位，无义突变往往引起严重的FVIII缺乏和临床表型。FVIII22内含子倒位突变引起FVIII严重缺乏是45%的重型血友病A的分子发

3、病机制。最近在1%的重型血友病A中还发现FVIII内含子1倒位突变。二．基因诊断（一）直接基因诊断：确定致病基因；携带者检出和产前诊断。采用PCR，DGGE，SSCP，DNA测序等方法直接测定致病基因的缺陷。FVIII22内含子倒位分析可作为重型HA的筛选试验，是目前唯一用于临床诊断的直接基因检测方法。FVIII22内含子倒位和其它一些基因突变常伴有抑制物发生，因此有助于预测抑制物的产生。（二）间接基因诊断利用致病基因内外的限制性片段长度多态性（RFLP）作为特异分子遗传标志物，通过家系成员间的连锁关系确定血友病基因的遗传情况，进行DNA多态性分析的遗传学诊断(R

4、FLP，VNTR，STR等方法)，联合多个RFLP，诊断率达可达99%。RFLP分析的局限性：须具有先证者的标本；母亲系该多态位点的杂合子，联合多个RFLP。（三）高危胎儿产前诊断妊9-12周：绒毛膜活检获取胎儿DNA。妊12-16周：养水穿刺。胚胎植入前：早期胚胎（8个细胞），通过DNA基因型和遗传表型确定胎儿性别，是否为血友病或携带者。妊18-20周：胎儿镜下取脐静脉血，测定VIII:C/FVIII:Ag。流产危险（约0.5%-1%）。早期，无创性产前诊断：FACS测定母体静脉血中的胎儿特异性单克隆抗体以确定胎儿性别。三．替代治疗目前最有效的治疗手段。主张尽早

5、治疗，将凝血因子提高到止血水平，避免出血并发征，防止功能丧失。（一）人FVIII浓缩物：近15年随着病毒灭活技术的改进（干热法-HIV，有机溶剂加表面活性剂方法-HCV，二步病毒灭活法-HAV），血浆筛选的规范化（PCR），血制品的安全性大大提高，血源传播性疾病如肝炎，爱滋病发生率明显降低。FVIII浓缩物中纯度：含FVIII1-3U/mg，每1U/kg可使血浆FVIII水平提高2%，含VWF，也可用于VWD。体内半寿期为8-12小时。副作用：病毒感染，抗FVIII抑制物产生。高浓度：含FVIII50-200U/mg，利用层析技术制备，不含VWF。超高纯度：

6、含FVIII3000U/mg，利用离子交换层析或单克隆抗体技术制备，不含VWF，用于FVIII抑制物(中高滴度,10-30BU)的治疗。（二）重组FVIII浓缩物（rFVIII）基因克隆技术表达，生物活性，半寿期与血浆FVIII相似，安全，无病毒污染。价格昂贵，也可产生抗体。加拿大与爱尔兰几乎所有HA，美国70%重型HA采用。主要用于重型血友病A和抑制物的治疗。第一代（全长FVIII）：人体白蛋白为稳定剂。第二代（BDD）：蔗糖为稳定剂，FVIII无B区，但仍保留其活性，无免疫活性，更安全，有效。第三代：鼠单抗，不含人和动物蛋白。转基因方法生产的人血浆制品的产量将

7、大幅度提高，有望满足全世界血友病患者的需要。（三）猪FVIII浓缩物抑制物对猪FⅧ的亲和性比对人FⅧ亲和性差，不易与人FⅧ抗体发生交叉反应,，用于高反应型抑制物且严重出血患者的治疗。约30%产生抗猪FⅧ抗体，造成耐药。开始足量，迅速降低抗体，抗体滴度<5BU：50u/kg；5-30BU：75-100u/kg；>30U：100-150u/kg。重组人-猪FⅧ混合物利用抗原性较弱的无B区的猪FVIII序列替代人FVIIIA2，活化的肽-A3和C2序列，以降低免疫原性与抗原性，可望成为治疗抑制物的新制剂。（四）FVIII旁路制剂-不依赖FVIII/FIX绕开内源性凝血途

8、径，通过补