脐带血用于血友病a产前诊断的研究

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1、脐带血用于血友病A产前诊断的研究　　【摘要】目的探讨应用脐带血对血友病A（HA）进行产前诊断的可行性及准确性。方法24例HA携带者妊娠20～２４周时在超声引导下抽取脐血，用一期法检测孕妇外周血及胎儿脐血FVⅢ：Ｃ，用ELISA方法检测FVⅢ：ＣＡｇ及ｖＷＦ；应用LDＰＣＲ技术对携带者及其胎儿进行内含子22倒位检测，对非倒位者应用Bｃ１　ⅠPCR／ＲＦＬＰ分析技术进行间接基因诊断。结果24例携带者血浆FVⅢ：Ｃ，ＦＶⅢ：ＣＡｇ及ｖＷＦ分别为36％～１５０％(平均79%±２２％)，90%～１３２％(平均102%±１８％），92％～１４１％(

2、平均107%±１６％）；２４例胎儿血浆FVⅢ：Ｃ，ＦＶⅢ：ＣＡｇ及ｖＷＦ分别为09％～９０％(平均417%±２５％），６０％～７７％（平均69%±１６％），５８％～７４％（平均66%±１３％），19例胎儿FVⅢ：Ｃ高于34%，5例胎儿FVⅢ：Ｃ低于5%；内含子22倒位胎儿1例，倒位携带者3例；Bc1Ⅰ　ＰＣＲ／ＲＦＬＰ连锁分析诊断中型HA胎儿2例。结论脐静脉穿刺取血测定FVⅢ：Ｃ是产前诊断HA的可行性手段，应用LDＰＣＲ和BclⅠ　ＰＣＲ／ＲＦＬＰ基因分析技术可提高HA携带者的诊断率。　　【关键词】血友病A；产前诊断；脐带穿刺　　　　【

3、Ａbstract】ObjectiveＴoinvestigatethefeasibilityandaccuracyofhemophiliaAprenataldiagnosisbyfetalbloodsampling.ＭethodsＣordocentesisedin24pregnanthemophiliaAcarriersduring20~２４　ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ　ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　Ⅷactivity(FVⅢ：Ｃ）ofcarrier’speripheralbloodandfetusu

4、mbilicalbloodinedbylongdistancepolymerasechainreaction,indirectlygenediagnosisethodinprenataldiagnosisofhemophiliaAtodetectFVⅢ：Ｃoffetusesumbilicalblood.ThetechnologyofLDＰＣＲandBclⅠPCR/RFLPcanimprovethedetectionofhemophiliaAcarrier.　　【ＫeyophiliaA，prenataldiagnosis，cordocen

5、tesis血友病A(HA)是一种最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病，其病因是由于凝血因子Ⅷ基因缺陷所致的凝血因子量的缺乏或质的异常，在男性中发病率为1／５０００［１］。患者需终生输注凝血因子Ⅷ(FVⅢ）制剂治疗和预防出血，给社会和家庭带来沉重的经济负担。由于目前缺乏对此病的根治措施，故致病基因携带者检测与产前诊断，是降低发病率、提高人口质素质的有效手段。通过产前诊断的方法，可以避免HA患儿或携带者出生，达到从源头上控制HA的目的。近年来，我们和山东省立医院妇产科合作应用脐带穿刺术抽取脐血对24名血友病A携带者进行了产前诊断，取得了较好的

6、效果，现报告如下。　　１临床资料　　１．１一般资料24例HA携带者来自河北、山东、河南等省的16个HA家系，经遗传学分析肯定携带者11人，可能携带者13人，家族先证者由本中心及其他省级医院按HA诊断标准进行确诊［2］，其中重型HA家系7例，中型9例。　　１．２血样采集HA携带者妊娠20～２４周时，用PTC穿刺针在带穿刺支架超声探头引导下经孕妇腹壁抽取胎儿脐血18　ｍｌ，加入含38％枸缘酸钠02　ｍｌ的离心管内，充分混匀，2400　ｒ／ｍｉｎ离心20min，取上层2／３血浆供FVⅢ：C、ＦＶⅢ：ＣＡｇ和ｖＷＦ检测，用白细胞层抽取DNA供基

7、因诊断，同时抽取孕妇和丈夫的外周静脉血按上述方法收集血浆和抽取DNA。　　１．3实验方法　　１．３．１主要仪器：德国BE公司THROMBOTIMER半自动血凝仪，瑞士产FAME全自动酶免分析仪，美国PerkinElmer公司的PE2400　ＰＣＲ扩增仪，美国贝克曼低温高速离心机，美国ALT超4型B超诊断仪，日本产经皮经肝胆管造影用B型穿刺针(简称PTC针)。　　１．３．２主要方法和试剂：用国际通用的一期法检测血浆FVⅢ：Ｃ，试剂盒购自美国太平洋公司和爱尔兰TrinityBiotech公司，质控血浆购自中国生物药品研究所；用ELISA方法

8、检测FVⅢ：ＣAｇ和verasechainreaction,LDＰＣＲ)引物及Tap酶购自北京朝阳医院。其他PCR反应用Taq酶是上海生工产品，二甲亚砜和琼脂糖购自美国Sigma公司。　　１．３．３样品DN