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1、三七总甙对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞TGF【摘要】目的探讨三七总甙(PNS)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导大鼠肾小球系膜细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组、诱导组(OX-LDL50μg/mL)和PNS200,400,800μg/mL组。半定量RT-PCR检测TGF-β1与MCP-1的mRNA表达,ELISA检测TGF-β1与MCP-1蛋白含量,免疫细胞化学观察NF-κBp65核转位。结果OX-LDL诱导系膜细胞TGF-β1与MCP-1表达增强,NF
2、-κB活化,p65核转位率增加。PNS干预后,TGF-β1与MCP-1表达及NF-κBp65核转位率较诱导组明显下降。结论PNS抑制OX-LDL诱导的系膜细胞TGF-β1与MCP-1表达;其机制可能与影响NF-κB核转位有关。【关键词】三七皂甙;脂蛋白类,LDL;肾小球膜;细胞,培养的;NF-κB;转化核因子β;单核细胞化学吸引蛋白质1ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofpanaxnotoginseng（PNS）onexpressionsoftransforminggroesangialcellsinducedbyOX-LDL.MethodsArat
3、glomerularmesangialcell(MC)lineculturedinvitroulatedbyOX-LDL(50μg/mL)andthentreatedL).RT-PCRRNA.ELISAinethelevelsofTGF-β1andMCP-1protEininthesupernatant.AndthetranslocationofNF-κBp65munocytochemistry.ResultsOX-LDLsignificantlyincreasedtheexpressionsofTGF-β1andMCP-1inMC.AfteraddingPNS,theexpression
4、levelsofTGF-β1andMCP-1remarkablydecreasedparedulatedbyOX-LDL.NF-κBactivitymarkedlyincreasedafterstimulationbyOX-LDL,thetranslocationrateofp65fromcytoplasmtonucleusoteexpressionsofTGF-β1andMCP-1inMC.PNScouldinhibitthispromotionofOX-LDL.TheeffectsofPNSontheactivationofNF-κBandtranslocationofp65maybe
5、oneofthemechanisms.KEYCP-1);这些细胞因子的异常表达与核转录因子-κB(NF-κB)有关［2-3］。笔者观察系膜细胞在OX-LDL与三七总甙(panaxnotoginsengsaponins,PNS)作用后TGF-β1与MCP-1表达变化及NF-κB核转位情况,对PNS在脂质性肾损伤中可能的保护效应进行探讨。1材料与方法1.1材料大鼠肾小球系膜细胞（武汉中国典型培养物保藏中心），以含10%胎牛血清的MEM进行常规贴壁培养，OX-LDL（中国协和医科大学生化教研室），三七总甙(纯度>99%,云南金泰得公司)，Trizol(美国Invitrogen公司)，逆转录
6、试剂盒(立陶宛Fermentas公司)；TGF-β1ELISA试剂盒（武汉博士德公司）,MCP-1ELISA试剂盒（上海森雄科技公司），ImageMasterVDS凝胶成像分析系统(英国SyngeneGenius)，兔抗大鼠NF-κBp65多克隆抗体（美国SantaCruz公司)。1.2方法1.2.1分组系膜细胞随机分为5组,每组5个复孔:(1)对照组:MEM;(2)诱导组:MEM+OX-LDL50μg/mL;(3)PNS200μg/mL组:MEM+OX-LDL50μg/mL+PNS200μg/mL;(4)PNS400μg/mL组:MEM+OX-LDL50μg/mL+PNS400μg/mL
7、;(5)PNS800μg/mL组:MEM+OX-LDL50μg/mL+PNS800μg/mL。培养24,36,48h后收集各组细胞检测TGF-β1与MCP-1的mRNA表达,培养48h后收集上清存-70℃备用。1.2.2RT-PCR检测TGF-β1与MCP-1的mRNA表达提取总RNA,按说明书进行cDNA合成,产物-20℃保存。PCR引物由上海鼎安生物科技公司合成。TGF-β1(392bp)上游:5’-GGACTCTC
