艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤保护作用的

《艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤保护作用的》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、贵阳医学院2011届硕士研究生毕业论文TDL-4ZB型台式低速离心机：湖南星科科学仪器厂；DG530酶联免疫检测仪：华东电子集团医疗装备有限公司；KJ-210A型振荡器：姜堰市康健医疗器具有限公司；TS-100型摇床：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；HH•B11•500电热恒温培养箱：上海市越进医疗器械一厂；722光栅分光光度计：上海第三分析仪器厂；PC1101佳能数码相机：日本佳能公司；20μl、100μl、200μl、1000μl加样枪：德国eppendorf股份公司；6孔板、24孔板、96孔板：Castor公司；SG120H型超声仪：上海冠特超声仪器有限公司；HealforceCO

2、2培养箱：上海力申科学仪器有限公司；SW-CF-IF型单人双面净化工作台：苏州净化设备有限公司；XDS-IB相差显微镜：重庆光学仪器厂。1.3试剂的配制1.3.1磷酸盐缓冲液(PBS)的配制微量天平称取KCl0.2g、KH2PO40.2g、NaCl8.0g、Na2HPO41.44g，溶于800ml超纯水中，充分搅拌溶解，用盐酸调节溶液的pH值至7.4，加超纯水定容至1L，高压蒸汽灭菌后，4℃保存。1.3.20.25%胰蛋白酶的配制称取胰蛋白酶0.25g，溶于已高压灭菌的PBS中，用NaHCO3液调节pH至7.4左右，搅拌混匀，然后再PBS溶液至100ml，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，

3、-20℃保存备用。1.3.30.1%胶原酶的配制取I型胶原酶0.1g，溶于已高压灭菌的PBS中，用NaHCO3液调节pH至7.4左右，搅拌混匀，然后再PBS溶液至100ml，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装成每瓶10ml，-20℃保存备用。1.3.4M199培养液配制将M199培养基干粉一袋溶于800ml超纯水中，按说明书加入NaHC033.7g，调节PH7.35~7.45，加超纯水定容至1L，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装成7贵阳医学院2011届硕士研究生毕业论文每瓶100ml，-20℃冰箱中保存。应用时根据需要，加入适量56℃灭活30min的胎牛血清。1.3OX-LDL的配

4、制将OX-LDL溶液1瓶(2g/L)溶于适量M199培养基中，分别使终浓度为50mg/L、100mg/L、200mg/L，过滤除菌后4℃冰箱中保存。1.4各药物的配制准确称取艳山姜挥发油(EOAZ)200μl(172mg)，溶于1mlDMSO中，再加入M199培养基至172ml，配成浓度为1g/L的母液，过滤除菌放入4℃冰箱，用时用M199培养基稀释成不同浓度。准确称取ASP标准品0.18g，加入M199培养基至10ml，充分搅拌使其全部溶解，配成浓度为0.1mol/L的母液，过滤除菌放入4℃冰箱，用时用M199培养基稀释成所需浓度。准确称取PRA标准品0.448g，加入M199培养基至

5、10ml，充分搅拌使其全部溶解，配成浓度为0.1mol/L的母液，过滤除菌放入4℃冰箱，用时用M199培养基稀释成所需浓度。准确称取CAR标准品0.406g，溶于1mlDMSO中，加入M199培养基至10ml，充分搅拌使其全部溶解，配成浓度为0.1mol/L的母液，过滤除菌放入4℃冰箱，用时用M199培养基稀释成所需浓度。1.5苏木素-伊红(HE)染液的配制称取0.5g苏木精、5.0g铵矾或钾矾和0.1g碘酸钠加温溶于70ml蒸馏水中。加入30ml甘油和2ml冰乙酸充分混匀后过滤即成母液。使用时用蒸馏水以1︰20稀释母液即成工作液。过滤除菌后用瓶塞密封，置低温暗处长期保存。将0.5g伊红

6、溶于100ml蒸馏水即成工作液。过滤除菌后用瓶塞密封，置低温暗处长期保存。1.6吉姆萨染液的配制称取姬姆粉0.5g、甘油22ml，置于干燥清洁研钵中，用少量的甘油与姬姆粉充分混合，研磨至无颗粒，再将剩余甘油混在一起。56℃保温2h后，加入33ml纯甲醇，混匀，即为姬姆萨母液，保存于棕色瓶内。1.7甲基四唑盐(MTT)液的配制8贵阳医学院2011届硕士研究生毕业论文微量天平称取准确称取MTT粉50mg，溶于已高压灭菌的PBS10ml中，充分搅拌混匀，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，-20℃保存备用。1.3台盼蓝染液的配制微量天平称取准确称取台盼蓝粉0.4g，溶于已高压灭菌的蒸馏水，定容至1

7、00ml中，充分搅拌混匀，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存备用。2人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的培养及鉴定1.3.1HUVEC的分离和纯化将含有双抗(青霉素100U/ml，链霉素100g/L)PBS保存的脐带迅速移入超净工作台内，无菌条件下将其放入提前预热37℃的含双抗PBS烧杯中洗涤3次，洗去残留的血液，然后放入培养皿中，剪去有钳夹痕及血肿的部分，挤出脐带中的血，用剪刀修齐两断面。找出脐静脉(2根管腔较小的是脐动脉，1根