信号转导和转录活化因子

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1、信号转导和转录活化因子　　弓清梅，任文霞，赵鹰，李建强，刘卓拉【摘要】目的探讨大鼠急性肺损伤（ALI）过程中，信号转导和转录活化因子-3（STAT3）的活化规律，及其与细胞因子白介素-6（IL-6）的相关性。方法健康雌性>n=10），ALIgroups(n=40).Afterintravenousinjectionofendotoxin(5mg/kg)fromtailvEin，animalseasurementoftheconcentrationofIL-6inbloodandBALFmunoassasy.ResultsLPStreatmentresultedinSTAT3activation

2、throughouttheresidentlungcells，asmatorycells.STAT3mRNAexpressioninlungconstitutionincreasedgradually，peakedat4thhourandstartedtodecreaseat6thhour.ThechangeofIL-6concentrationinbloodandBALFisconsistentRNAexpression，andthetentalresultshoayactivateSTAT3patha公司产品；STAT3原位杂交试剂盒、DAB显色液及原位杂交盖玻片均购自武汉博士德公司；碘（

3、125I）IL-6放免试剂盒购自北京北免东雅生物技术研究所。1.2方法1.2.1动物分组及模型50只雌性健康ias-2000细胞图像分析仪对染色结果行半定量分析，在显微镜(×200)下以相同外部条件(亮度)摄取bmp图像，每张切片摄10副，STAT3mRNA原位杂交图像行平均光密度值测定，每张切片取均值。1.4血及支气管肺泡灌洗液中IL-6的测定将冻存的血清及支气管肺泡灌洗液置于室温下复融、混匀，采用放免法检测，操作严格按照试剂盒说明书。该试剂盒灵敏度：＜50pg/ml。1.5统计学分析实验数据采用SPSS13.0软件包进行分析，数据以（x±s）表示，采用q检验、方差分析和直线相关分析，P&l

4、t;0.05为差异有显著性。2结果2.1肺组织病理学改变注射LPS后1h大鼠肺组织尤其是肺血管内中性粒细胞（PMN）滞留、聚集，以后随时间延长，各组PMN滞留、聚集现象更加严重，并有向毛细血管外移行趋势，肺泡腔逐渐缩窄，肺泡隔明显增厚。生理盐水对照组大鼠肺组织结构正常。表明模型制备成功。2.2ALI不同时间段肺组织中STAT3mRNA的表达镜下结果显示：STAT3mRNA在正常肺组织弱表达，LPS损伤后，表达逐渐增多，同时可看到在多种肺组织细胞中均可观察到STAT3mRNA的表达，包括肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞肺血管内皮细胞及炎症细胞等，见图1~5。经图像分析得出不同时间段肺组织中STAT3

5、mRNA的表达情况：正常肺组织有少量STAT3mRNA的表达，其平均光密度值为0.13±0.5，LPS损伤1h后STAT3mRNA表达开始升高，2h明显表达，4h达峰值，6h表达有所下降，经统计学分析，各组间比较，P<0.05，差异有显著性，见表1。表1对照组及LPS损伤后不同时间段STAT3mRNA表达的平均光密度值比较（x±s，n=10）对照组LPS1h组LPS2h组LPS4h组LPS6h组0.07±0.050.16±0.080.59±0.110.90±0.110.74±0.09注：经方差分析显示，LPS1h组与对照组比较，I<0.05；LPS6h与LPS4h、LPS2h比较，

6、P<0.01；余各组间P<0.0012.3血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-6的值IL-6在正常血清和BALF中均可测到，其浓度值分别为（74.71±14.96）pg/ml和（58.14±10.39）pg/ml，经LPS处理后1h血和BALF中IL-6值均上升，4h达峰值，6h后开始下降，经统计学分析显示各组间差异有显著性（P<0.05），见表2。2.4相关分析血及支气管肺泡灌洗液中IL-6的浓度与急性肺损伤组织STAT3mRNA的表达的相关性分析显示，它们之间明显相关，相关系数r分别为0.936、0.889，P<0.01。表2血及BALF中IL-6浓度的变化(

7、x±s，n=6，pg/ml)组别血BALF正常组74.71±14.9658.14±10.39LPS1h组235.26±43.10119.32±20.62LPS2h组751.78±94.07316.43±43.82LPS4h组1640.1±203.77962.58±140.86LPS6h组1029.22±177.61675.70±97.713讨论JAK-STAT途径是细胞内最为简捷的信号转导通路之一