鼻咽癌组织中信号转导与转录活化因子3与潜伏膜蛋白

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1、鼻咽癌组织中信号转导与转录活化因子3与潜伏膜蛋白【摘要】目的研究鼻咽癌组织中信号转导与转录活化因子3(signaltransducerandactivatoroftranscription3,STAT3)的表达和活化状态及其与爱泼斯坦-巴尔病毒(EpsteinBarrvirus,EBV)编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein1,LMP1)表达的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测45例鼻咽癌、27例慢性鼻咽炎组织中LMP1、STAT3和磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白的表达并分析其相关性。结果鼻咽癌组织中LMP1、ST

2、AT3和pSTAT3蛋白的阳性率均高于慢性鼻咽炎组织(P<0.01)。相关分析结果显示，LMP1和pSTAT3表达呈正相关关系(rs=0.302，P<0.05)，但LMP1与STAT3表达无明显相关(P>0.05)。结论鼻咽癌组织中存在STAT3蛋白高表达和异常激活;LMP1可能参与STAT3的活化。【关键词】鼻咽肿瘤;信号转导与转录活化因子3;潜伏膜蛋白1　　ABSTRACT:ObjectiveTostudytheexpressionandactivationofsignaltransducerandactivatoroftr

3、anscription3(STAT3)inhumannasopharyngealcarcinoma(NPC)tissuesanditsrelationembraneprotein1(LMP1)encodedbyEpsteinBarrvirus.MethodsTheexpressionsofLMP1,STAT3andphosphatedSTAT3(pSTAT3)in45casesofNPCand27casesofchronicnasopharyngitismunohistochemicalmethod.Correlationbetalactivat

4、ionofSTAT3proteininNPCtissues.LMP1mayplayaroleintheactivationofSTAT3.　　KEYP1)　　鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)是我国南方及东南亚地区常见的恶性肿瘤之一，目前认为其发病与爱泼斯坦巴尔病毒(EpsteinBarrvirus,EBV)感染、遗传及环境等因素有关。EBV编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein1,LMP1)由于能转化小鼠成纤维细胞并在裸鼠体内成瘤而被视为EBV的瘤基因[1]。信号转导和转录活化因子(sign

5、altransducersandactivatorsoftranscription,STATs)家族是一种存在于胞质并在激活后能够转入核内与DNA结合的蛋白家族。STATs家族成员中，STAT3与肿瘤的关系最为密切[2]。目前，对于STAT3在鼻咽癌中表达及其与LMP1相关性的研究报道甚少，本文研究鼻咽癌组织中STAT3的表达及其与LMP1的关系。　　1材料与方法　　1.1临床资料收集广东医学院附属医院2005～2006年石蜡标本，共72例。其中鼻咽癌标本45例(男26例，女19例，均为鼻咽非角化性癌)，患者年龄18～76岁，中位年龄49岁。慢性鼻咽

6、炎标本27例(男16例，女11例)，患者年龄16～79岁，中位年龄47岁。所有病例资料完整，诊断前均未行放疗或化疗。　　1.2主要试剂鼠抗人LMP1单克隆抗体(克隆CS.1～4)购自丹麦DAKO公司，兔抗人STAT3多克隆抗体购自美国Neomarkers公司，兔抗人磷酸化STAT3(PhosphoTyr705)多克隆抗体为美国SignalL/L中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片。切片经常规脱蜡、水化后，高压修复抗原，30mL/L过氧化氢孵育5min以阻断内源性过氧化物酶;正常山羊血清封闭20min。滴加稀释好的一抗(LMP1为1∶100稀释，S

7、TAT3和pSTAT3均为1∶50稀释)，4℃过夜孵育。滴加1∶100生物素标记的二抗，室温孵育15min。滴加辣根过氧化物酶标记的卵白素，室温孵育15min。DAB显色，苏木素复染细胞核，脱水、透明、中性树脂封片。　　1.4结果判断每一批免疫组化染色均设已知阳性对照和用PBS代替一抗的空白对照。LMP1阳性表达定位于胞膜和胞质，STAT3阳性表达定位于胞质，　　pSTAT3阳性表达定位于胞核和胞质。由两名病理诊断医生分别对实验结果进行双盲法评估。每一切片随机选择5个视野(×100)，在显微镜(×400)下计数每个视野100个肿瘤细胞，非癌组织则

8、计数着色区100个细胞中阳性细胞的比例，取5个视野的平均百分数为判定结果。评分标准参照文献[34]作适当修