脆弱类杆菌荧光定量pcr法检测论文

《脆弱类杆菌荧光定量pcr法检测论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、脆弱类杆菌荧光定量PCR法检测论文【关键词】脆弱类杆菌；荧光定量PCR；SYBR,Green,I摘要：目的探讨荧光定量PCR技术检测脆弱类杆菌。方法用特异性引物和荧光染料实时PCR扩增并检测产物。结果脆弱类杆菌标准株(ATCC25285)和4株分离株均有特异扩增曲线，灵敏度达102个菌；而大肠埃希菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌无特异扩增曲线。结论荧光染料实时PCR技术可特异并定量检测脆弱类杆菌关键词：脆弱类杆菌；荧光定量PCR；SYBRGreenIDetectionbacteriafragilebySYBRGreenreal-timePCRAbstract：Obje

2、ctiveToidentifythebacteriafragiles(B.fragiles)by16StargetrRNArealtimePCR.MethodsApairofspecificprimersePCR.ResultsTheB.fragilisATCC25285and4separativestrainsofB.fragilisappearedinthespecialamplificationproductcurve,ophilusdidnot.TheflourescentqantificativePCRcandetect102bacteria.Conclu

3、sion16SrRNAtargetedprimerandfluorescentquantifiverealtimePCRcanbeapplicablefortheidentificationandquantificationofB.fragilis.Keyp5700,美国Perkin-Elmer公司），离心机；细菌基因组提取试剂盒、ExTaqDNA聚合酶、10×缓冲液、SYBRPremixExTaqTM（perfectReal-time）荧光染料〔TakaRa宝生物工程（大连）有限公司〕。12方法121引物设计在16SrRNA序列中第831-864位点和982-10

4、07位点，通过分析软件Blast(ncbinlmnihgov)同GenBank中大肠埃希菌等基因序列相比较.freell，倍比稀释使每1μl提取液中含有107,106,105,104,103,102,10,1个细菌的DNA，进行荧光定量PCR。扩增产物的融解曲线用配套分析软件中的DissociationProtocol程序制图和分析。124SYBRGreenⅠ嵌和荧光染料实时PCR反应体系及条件10×Buffer（含SYBRGreen染料Mg2+dNTPTaq酶）5μl；正反向引物各02μl（10μmol）；待检样品1μl，加水34μl混匀后，按95℃10s，95℃

5、5s，60℃34s，共进行40个循环。2结果21特异性PCR结果显示，5株脆弱类杆菌均有特异扩增曲线，而大肠埃希菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌无特异扩增曲线。22灵敏度（图1）图1可见，荧光信号强度（Rn）维持在基线（0对应的横线）上，15个循环后，Rn开始上升。107，106，105的扩增曲线在30个循环后到平台期，104,.freeluRinttil，etal.parisonofreal-timePCRicrobiology,2003,149：269-277.〔3〕卞广林，罗予.16SrRNAPCR鉴定脆弱类杆菌［J］.生物技术通讯,2006,17（1）：066

6、-067.〔4〕沈永才，袁佩娜.16SrRNA荧光PCR法检测双歧杆菌［J］.中国微生态学杂志，2001,13（2）：66-69，72.