乳腺癌雌激素受体α基因启动子甲基化与其蛋白表达的关系论文

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1、乳腺癌雌激素受体α基因启动子甲基化与其蛋白表达的关系论文布立敬，苏世振，李红智，林蓓蓓，张英俊【摘要】目的：检测乳腺癌雌激素受体α(estrogenreceptorα，ERα)基因启动子区CpG岛甲基化状态，探讨乳腺癌ERα启动子甲基化与其蛋白表达及临床病理的关系。方法：采用免疫组化EnVisionTM二步法检测20例正常乳腺组织、44例乳腺癌组织ERα基因的表达，同时运用甲基化特异性PCR(Methylation-SpecificPCR.freelethylationofCpGislandinestrogenreceptora

2、lpha(ERα)genepromotorinbreastcancer，andstudytherelationshipamongERαgenepromotormethylation，ERαexpression，andtheclinicopathologicalcharacteristicsinbreastcancer.Methods:TheEnVisionTMtmunohistochemistrymethodalbreasttissuesand44casesofbreastcancertissues.Themethylation

3、ofCpGislandinERαgenepromotorregionAandBethylation-specificPCR(MSP)andsequencing.Results:In32casesofERαpositivebreastcancertissues，themethylationratesofERαpromotorregionAandBethylationratesofERαpromotorregionAandBethylationratesofERαpromotorregionAandBinERαnegativebre

4、astcancertissues，ERαpositivebreastcancertissuesandbreastcancertissuesalbreasttissues(P0.05).ThemethylationratesofERαnegativebreastcancertissuesotormethylationinbreastcancer.Conclusion:ThesilencingofERαgeneexpressionissuggestedtobesignificantlyrelatedethylationofCpGis

5、landintheERαpromotorregioninbreastcancer.ThemethylationofCpGislandmaybeethemolecularmarkerindicatingbadprognosisofbreastcancer.Keyor；estrogenreceptor；DNAmethylation；CpGisland；MSP雌激素活体（estroqenreceptor，ER）是抗雌激素类药物内分泌治疗的靶点，也是预后的重要指标1-4。ER阴性或表达下调是内分泌治疗失败及预后不良的因素。约1/4乳腺癌

6、组织无ER表达，并且原先ER阳性的乳腺癌患者在肿瘤进程中有1/3转为ER阴性5。有文献报道，ER阴性与基因的变异（如插入、缺失、重组或点突变等）未发现有明确的联系，而DNA甲基化是其表达失活的主要原因之一6。研究显示，启动子异常甲基化在许多肿瘤的发生过程中是一个频发的早期事件，因此肿瘤相关基因的甲基化状态是肿瘤发生的一个早期敏感指标，可以作为一种有前景的肿瘤分子标志物。本研究运用甲基化特异性PCR(Methylation-SpecificPCR，MSP)分别检测正常乳腺组织、乳腺癌组织ERα基因启动子区CpG岛的甲基化状态，分析

7、乳腺癌ERα启动子甲基化与其蛋白表达及临床病理的关系，进一步探讨ERα启动子甲基化作为乳腺癌临床诊断和治疗的分子标志物的可能性，为肿瘤去甲基化治疗提供理论依据。1材料和方法1.1标本来源由温州医学院附属第一医院病理科提供新鲜组织标本。包括20例正常乳腺组织和44例乳腺癌组织。病理组织学分型(二步法抗ERα抗体和通用型二步法检测试剂盒均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。染色操作按照试剂盒说明书进行。以PBS代替一抗为空白对照。以试剂盒中提供的已知阳性片为阳性对照。ER阳性物质(棕黄色)位于胞核。每张切片随机选择10个高倍视野，每

8、个视野随机观察100个细胞，计算其中阳性细胞比例(阳性细胞按染色棕褐、棕黄、浅黄分别乘以系数1、2/3、1/3来计算数目)。ER阳性细胞比例≥10%计作阳性。1.3DNA提取新鲜组织标本，经蛋白酶K消化，酚、氯仿、异戊醇法提取DNA，并测定DNA浓度和含量。1.