大鼠胎血与骨髓非造血成体干细胞体外分化能力的比较论文

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1、大鼠胎血与骨髓非造血成体干细胞体外分化能力的比较论文.freelatopoieticadultstemcells，NASC）体外培养过程中的生长特性及体外诱导两者向神经元样细胞分化的异同，在无菌条件下采集孕大鼠的胎血和成年大鼠的骨髓.freelatopoieticAdultStemCellsfromRatFetalBloodandBoneMarroatopoieticadultstemcells(NASC)derivedfromratfetalbloodandratbonemarrocellsintoneuron-likec

2、ellsinvitro，thefetalbloodofpregnantratsandbonemarroononuclearcells(MNC)(FBS).TheacquiredNASCsmunophenotypeofNASCsetry.TheexpandedNASCsercaptoethanol(β-ME)，dimethylsulfoxide(DMSO)，butylatedhydroxyanisole(BHA).Thespecificmarkersoftheseneuron-likecellsmunocytochemistr

3、y.Theresultsshoogeneousspindle-shapedandexpressedantigensCD44andCD54，butdidnotexpressedCD11bandCD45.Thebothinducedcellsilartoneuroninmorphologyandpregenantratefetalbloodandadultratbonemarroorphologyandbiologicalcharacteristics.NASCsofbothoriginscanbeinducedtodiffer

4、entiateintoneuron-likecells，sofetalbloodcanberegardedasanotherresourceofNASC.Keycell；non-hematopoieticstemcell；fetalblood;bonemarroatopoieticstemcell，NASC）是骨髓中除造血干细胞外的来自各胚层的成体干细胞，包括具有CD34-及贴壁生长特点的间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSC）、心肌干细胞、神经干细胞等。在适宜的信号刺激下NASC能够被诱导分化成不同的

5、骨髓微环境组成成分，如成骨细胞、脂肪细胞和基质细胞，也能分化为神经细胞［1］、肝细胞等。最近有学者已证实了人脐血也能分离培养出NASC，后者可向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞及肝细胞等分化［2］。相对于骨髓NASC来讲，脐血的来源丰富，收集方法简便易行，微生物和肿瘤细胞污染的可能性比较小，避免了自体髂骨穿刺获取骨髓的局限性。因此，脐血NASC作为一种新来源，用于细胞工程研究具有广阔的前景。我们分离培养大鼠胎血和骨髓NASC，观察比较两者生长特性及向神经元样细胞的分化能力有何异同。材料和方法动物与试剂20只孕20天的E

6、D/LG培养液、胎牛血清（FBS）购于Gibco公司，β-甘油磷酸、异丙基甲基黄嘌呤、β-巯基乙醇（β-ME）、二甲亚砜（DMSO）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）购于Sigma公司，FITC标记的小鼠抗大鼠CD11b、CD44、CD54、CD45单克隆抗体及小鼠IgG1单克隆抗体购于SEROTEC公司，兔抗大鼠GFAP、nestin、NSE抗体及免疫组织化学试剂盒购于Boster公司。胎血NASC分离培养无菌条件下，腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg使孕鼠麻醉后，剖腹取胎鼠，剪断其颈部吸取断面血液，剪开胸腔抽取其心脏中血液至含

7、肝素30U/ml的DMEM/LG培养液中。密度梯度离心法收获MNC，PBS洗涤2次，按1×108cells/cm2的细胞密度接种于培养瓶中，培养液为含10%FBS、青霉素100U/ml、链霉素100U/ml的DMEM/LG，将培养瓶置于37℃、饱和湿度的5%CO2培养箱中培养。1周后首次换液，每周换液2次。当细胞融合达70%-80%时用2.5g/L胰蛋白酶消化，按1∶3传代培养。骨髓NASC分离过量麻醉处死大鼠，无菌条件下取出股骨、胫骨，用含肝素30U/ml的DMEM/LG培养液反复冲洗骨髓腔，获得骨髓冲洗液后离心、种植培养

8、方法同上述胎血。NASC的免疫表型检测分别取扩增3、6代的胎血和骨髓NASC，用2.5g/L胰蛋白酶消化后，再用含10%FBS的PBS洗涤，制成浓度为1×106cells/ml的单细胞悬液。分别加入10μlFITC标记的小鼠抗大鼠CD11b、CD44、CD54、CD45单抗，阴性对照加入小