大鼠胎血与骨髓非造血成体干细胞体外分化能力的比较

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1、大鼠胎血与骨髓非造血成体干细胞体外分化能力的比较鞠秀丽，黄志伟，侯怀水，时庆，段春红，沈柏均【摘要】为了比较大鼠胎血和骨髓中非造血成体干细胞（non-hematopoieticadultstemcells，NASC）体外培养过程中的生长特性及体外诱导两者向神经元样细胞分化的异同，在无菌条件下采集孕大鼠的胎血和成年大鼠的骨髓，用Ficoll-hypague分离液分离出单个核细胞（MNC）后，种植于含10%胎牛血清的DMEM/LG培养液内。收获的NASC传代培养，用流式细胞仪检测细胞的免疫表型。β-巯基乙醇（β-ME）、二甲亚砜（DMSO）和叔

2、丁基对羟基茴香醚（BHA）诱导NASC向神经元分化，用免疫细胞化学染色检测其特异性标志巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果发现:传代培养后的两种NASC的形态相似，皆呈均一的梭形；流式细胞仪检测结果示两种NASC的免疫表型无明显差异，表达CD44、CD54，不表达CD11b、CD45；定向诱导的两种NASC具典型神经元形态，免疫细胞化学染色显示nestin和NSE为阳性，但GFAP为阴性。结论：大鼠胎血和骨髓非造血成体干细胞的细胞形态、生物学特性无明显差别；两者都可被诱导分化为神经

3、元样细胞；胎血应是NASC的又一来源。【关键词】成体干细胞；非造血成体干细胞；胎血；骨髓；细胞生物学；神经元样细胞　　DifferentiatingAbilityofNon-hematopoieticAdultStemCellsfromRatFetalBloodandBoneMarroatopoieticadultstemcells(NASC)derivedfromratfetalbloodandratbonemarrocellsintoneuron-likecellsinvitro，thefetalbloodofpregnantratsa

4、ndbonemarroononuclearcells(MNC)(FBS).TheacquiredNASCsmunophenotypeofNASCsetry.TheexpandedNASCsercaptoethanol(β-ME)，dimethylsulfoxide(DMSO)，butylatedhydroxyanisole(BHA).Thespecificmarkersoftheseneuron-likecellsmunocytochemistry.Theresultsshoogeneousspindle-shapedandexpresse

5、dantigensCD44andCD54，butdidnotexpressedCD11bandCD45.Thebothinducedcellsilartoneuroninmorphologyandpregenantratefetalbloodandadultratbonemarroorphologyandbiologicalcharacteristics.NASCsofbothoriginscanbeinducedtodifferentiateintoneuron-likecells，sofetalbloodcanberegardedasa

6、notherresourceofNASC.　　Keycell；non-hematopoieticstemcell；fetalblood;bonemarroatopoieticstemcell，NASC）是骨髓中除造血干细胞外的来自各胚层的成体干细胞，包括具有CD34-及贴壁生长特点的间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSC）、心肌干细胞、神经干细胞等。在适宜的信号刺激下NASC能够被诱导分化成不同的骨髓微环境组成成分，如成骨细胞、脂肪细胞和基质细胞，也能分化为神经细胞〔1〕、肝细胞等。最近有学者已证实了人脐血也能分离培养

7、出NASC，后者可向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞及肝细胞等分化〔2〕。相对于骨髓NASC来讲，脐血的来源丰富，收集方法简便易行，微生物和肿瘤细胞污染的可能性比较小，避免了自体髂骨穿刺获取骨髓的局限性。因此，脐血NASC作为一种新来源，用于细胞工程研究具有广阔的前景。我们分离培养大鼠胎血和骨髓NASC，观察比较两者生长特性及向神经元样细胞的分化能力有何异同。　　材料和方法　　动物与试剂　　20只孕20天的ED/LG培养液、胎牛血清（FBS）购于Gibco公司，β-甘油磷酸、异丙基甲基黄嘌呤、β-巯基乙醇（β-ME）、二甲亚砜（DMS

8、O）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）购于Sigma公司，FITC标记的小鼠抗大鼠CD11b、CD44、CD54、CD45单克隆抗体及小鼠IgG1单克隆抗体购于SEROTEC公司，兔