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时间:2018-11-18
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1、人参皂苷Rg1对AD模型大鼠脑片PTau、PKA影响的实验研究论文李玺张欣张智燕袁海峰权乾坤【摘要】目的研究人参皂苷Rg1对AD模型大鼠脑片磷酸化微管相关蛋白(PTau)、蛋白激酶A(PKA)表达的调控作用。方法采用冈田酸诱导大鼠培养脑片Tau蛋白过度磷酸化,制备成AD模型,运用免疫组织化学、图像分析技术等方法,观察人参皂苷Rg1对各组大鼠脑片PTau、PKA表达的影响。结果模型组PTau、PKA表达水平明显高于空白对照组(P0.01);人参皂苷Rg1各剂量组PTau、PKA表达水平虽高于空白对照组,但低于模型组(P0.01
2、或P0.05),且大、中剂量组优于小剂量组;人参皂苷Rg1呈一定的剂量依赖性下调PTau、PKA的表达。结论人参皂苷Rg1能通过降低PTau水平、下调PKA的表达从而减缓神经纤维缠结、老年斑的形成,以发挥抗痴呆的作用。【关键词】人参皂苷Rg1;阿尔茨海默病;Tau蛋白;蛋白激酶A【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofginsenosideRg1ontheexpressionsofPTauandPKAonthebrainslicesofADmodelrats.MethodsADmodels
3、odelratbrainslicesineachgroupmunohistochemistryandimageanalysistechnology.ResultsTheexpressionsofPTauandPKAinmodelgroupalcontrolgroup(P0.01).TheexpressionsofPTauandPKAinGinsenosideRg1groupsalcontrolgroup,butodelgroup(P0.01orP0.05),andGinsenosideRg1shoentiathroughinhib
4、itingtheexpressionsofPTauandPKAandsloationofneurofibrillarytangles.【Keyer′sdisease;ProteinTau;cAMPdependentkinaseA人参皂苷Rg1是从人参中提取的一类生物活性成分〔1〕,有增强记忆和认知功能的作用.freelerdisease,AD)的核心病理变化,并且NFT的数目与AD病人的痴呆程度密切相关。研究表明cAMP依赖的蛋白激酶A(cAMPdependentkinase,PKA)是导致Tau蛋白发生磷酸化的关键激酶〔2〕,
5、本实验参照国内外有关文献〔3~5〕,采用冈田酸(okadaicacid,OA)诱导的大鼠培养脑片方法,建立Tau蛋白过度磷酸化的AD模型,观察人参皂苷Rg1对PTau、PKA的调控作用,旨在阐明人参皂苷Rg1抗痴呆作用机制。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物雄性SO),配制成1mg/mlDMSO溶液待用。PTau和PKA多克隆抗体及免疫组织化学试剂盒(SABC)购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2方法1.2.1动物模型的建立1.2.1.1离体海马脑片的制备大鼠在6%水合氯醛(400mg/kg)麻醉下切开头皮,暴露颅骨,迅速
6、断头,取脑,置于0~4℃经95%O2和5%CO2混合气体饱和的人工脑脊液冰水混合物中,洗净血液并降温后,用振动切片机以振幅8档,速度3档行冠状切片切3~4片海马脑片,厚度400μm。然后取海马及皮层脑片,挑选形态较好的脑片置入盛有人工脑脊液的6孔板中培养,温度(32.0±0.5)℃中孵育1~2h,整个过程持续通入混合氧气(95%O2+5%CO2)。人工脑脊液成分:(mmol/L)(150NaCl,2CaCl2,1.2MgSO4,0.5KH2PO4,1.5K2HPO4,10glucose,pH7.4)。1.2.1.2离体海马脑片的分组空
7、白对照组、模型组、人参皂苷Rg1大、中、小剂量组脑片开始均培养于人工脑脊液中不做任何处理,1h后人参皂苷大、中、小剂量组分别加入浓度为60、120、240μmol/L的人参皂苷Rg1。培养至3h时,模型组和各药物干预组分别加入OA至其浓度达到1μmol/L。至6h时,取出脑片。1.2.2标本制备及检测指标1.2.2.1标本制备取出的脑片迅速经人工脑脊液清洗后,用4%多聚甲醛固定4h,取出,转入30%蔗糖溶液浸泡至沉底,做冰冻切片,切片10μm厚,每张切片含皮层、海马、齿状回,然后进行免疫组化染色。1.2.2.2指标检测组织切片经抗原修
8、复,3%H2O2阻断内源性过氧化物酶10min,一抗PTau(ser202)1∶100,一抗PKA1∶100,4℃过夜,生物素标记的二抗和SABC试剂各在室温下作用30min,最后DAB显色,苏木素轻度复染,PBS代替
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