人参皂苷rg1对ad模型大鼠脑片ptau、pka影响的实验研究论文

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1、人参皂苷Rg1对AD模型大鼠脑片PTau、PKA影响的实验研究论文李玺张欣张智燕袁海峰权乾坤【摘要】目的研究人参皂苷Rg1对AD模型大鼠脑片磷酸化微管相关蛋白(PTau)、蛋白激酶A(PKA)表达的调控作用。方法采用冈田酸诱导大鼠培养脑片Tau蛋白过度磷酸化，制备成AD模型，运用免疫组织化学、图像分析技术等方法，观察人参皂苷Rg1对各组大鼠脑片PTau、PKA表达的影响。结果模型组PTau、PKA表达水平明显高于空白对照组(P0.01);人参皂苷Rg1各剂量组PTau、PKA表达水平虽高于空白对照组，但低于模型组(P0.01

2、或P0.05)，且大、中剂量组优于小剂量组;人参皂苷Rg1呈一定的剂量依赖性下调PTau、PKA的表达。结论人参皂苷Rg1能通过降低PTau水平、下调PKA的表达从而减缓神经纤维缠结、老年斑的形成，以发挥抗痴呆的作用。【关键词】人参皂苷Rg1;阿尔茨海默病;Tau蛋白;蛋白激酶A【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofginsenosideRg1ontheexpressionsofPTauandPKAonthebrainslicesofADmodelrats.MethodsADmodels

3、odelratbrainslicesineachgroupmunohistochemistryandimageanalysistechnology.ResultsTheexpressionsofPTauandPKAinmodelgroupalcontrolgroup(P0.01).TheexpressionsofPTauandPKAinGinsenosideRg1groupsalcontrolgroup,butodelgroup(P0.01orP0.05),andGinsenosideRg1shoentiathroughinhib

4、itingtheexpressionsofPTauandPKAandsloationofneurofibrillarytangles.【Keyer′sdisease;ProteinTau;cAMPdependentkinaseA人参皂苷Rg1是从人参中提取的一类生物活性成分〔1〕，有增强记忆和认知功能的作用.freelerdisease，AD)的核心病理变化，并且NFT的数目与AD病人的痴呆程度密切相关。研究表明cAMP依赖的蛋白激酶A(cAMPdependentkinase，PKA)是导致Tau蛋白发生磷酸化的关键激酶〔2〕，

5、本实验参照国内外有关文献〔3～5〕，采用冈田酸(okadaicacid，OA)诱导的大鼠培养脑片方法，建立Tau蛋白过度磷酸化的AD模型，观察人参皂苷Rg1对PTau、PKA的调控作用，旨在阐明人参皂苷Rg1抗痴呆作用机制。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物雄性SO)，配制成1mg/mlDMSO溶液待用。PTau和PKA多克隆抗体及免疫组织化学试剂盒(SABC)购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2方法1.2.1动物模型的建立1.2.1.1离体海马脑片的制备大鼠在6%水合氯醛(400mg/kg)麻醉下切开头皮,暴露颅骨,迅速

6、断头，取脑，置于0～4℃经95%O2和5%CO2混合气体饱和的人工脑脊液冰水混合物中,洗净血液并降温后，用振动切片机以振幅8档，速度3档行冠状切片切3～4片海马脑片，厚度400μm。然后取海马及皮层脑片，挑选形态较好的脑片置入盛有人工脑脊液的6孔板中培养，温度(32.0±0.5)℃中孵育1～2h，整个过程持续通入混合氧气(95%O2+5%CO2)。人工脑脊液成分：(mmol/L)(150NaCl，2CaCl2，1.2MgSO4，0.5KH2PO4，1.5K2HPO4，10glucose，pH7.4)。1.2.1.2离体海马脑片的分组空

7、白对照组、模型组、人参皂苷Rg1大、中、小剂量组脑片开始均培养于人工脑脊液中不做任何处理，1h后人参皂苷大、中、小剂量组分别加入浓度为60、120、240μmol/L的人参皂苷Rg1。培养至3h时，模型组和各药物干预组分别加入OA至其浓度达到1μmol/L。至6h时，取出脑片。1.2.2标本制备及检测指标1.2.2.1标本制备取出的脑片迅速经人工脑脊液清洗后，用4%多聚甲醛固定4h，取出，转入30%蔗糖溶液浸泡至沉底，做冰冻切片，切片10μm厚，每张切片含皮层、海马、齿状回，然后进行免疫组化染色。1.2.2.2指标检测组织切片经抗原修

8、复，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶10min，一抗PTau(ser202)1∶100，一抗PKA1∶100，4℃过夜，生物素标记的二抗和SABC试剂各在室温下作用30min，最后DAB显色，苏木素轻度复染，PBS代替