益气化淤中药对大鼠胃癌前病变蛋白激酶c蛋白表达的影响论文

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1、益气化淤中药对大鼠胃癌前病变蛋白激酶C蛋白表达的影响论文【摘要】目的观察益气化淤中药对大鼠胃癌前病变胃黏膜蛋白激酶C（PKC）表达的影响。方法采用MNNG、乙醇、饥饱失常等多因素造模。造模型成功后，将造模存活大鼠随机分为自然恢复组，中药高、中、低剂量组,各组大鼠作相应的处理后,免疫组化法检测各组大鼠胃黏膜组织PKC表达水平。结果各治疗组PKC表达较自然恢复组下调,有显著性差异(P0.05)。结论益气化瘀中药可能是下调PKC的表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，而发挥对大鼠胃癌前病变的治疗作用。【关键词】胃癌前病变蛋白激酶C益气化淤中药Abstra

2、ct：ObjectiveToobservetheeffectofYiqiHuayuRecipeontheexpressionofproteinkinaseC(PKC)inratsodelofGPLainlythroughN-methyl-N-nitroN-nitrosoguanidine(MNNG)togetherulationandunduehungerandovereating.Thesurvivedratsaftermodelinglydividedintospontaneousrecovery,andhigh-,moderate-and

3、loent,theexpressionofPKCmunohistochemicalmethod.ResultsTheexpressionofPKCineachtreatmentgroupentofratsl。1.2造模及给药方法选用SPF级6周龄SD♂大鼠62只，体质量100～120g。造模参照严茂祥等［2～6］综合造模方法并加以改进。大鼠自购进后适应性喂养1d。从62只大鼠中随机抽取13只作为正常组,其余49只用于造模。正常组大鼠不做任何处理；造模大鼠每日自由饮用100mg/LMNNG液(饮料瓶用油漆涂黑避光)、进食含0.3g/L雷尼替丁的纯

4、鼠饲料、上午用56℃150g/L的氯化钠液按10ml/kg灌胃，进食2d，禁食1d，进食当天下午用8.5g/L脱氧胆酸钠溶液按10ml/kg灌胃。禁食当天下午用400ml/L乙醇按10ml/kg灌胃，连续24周。24周末时随机抽取正常组和造模大鼠各1只，杀检，观察组织病理学变化(以HE染色光学显微镜下观察的结果为主)，确认模型是否成功。造模型成功后，将造模存活的48只大鼠随机分为自然恢复组12只。中药高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)各12只。高剂量组每日每只按20g/kg(相当于成人1d用量的两倍)灌胃，中剂量组按10g/kg(相当于成

5、人1d用量)灌胃，低剂量组按5g/kg(相当于成人1d用量的50%)灌胃。上述治疗16周。自然恢复组同正常组大鼠常规饮食。40周末所有动物禁食1d，处死，剖腹取胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，肉眼观察，平铺于硬纸板上，于胃窦部剪取组织1块，40g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋,切片5μm,免疫组织化学染色。1.3PKC蛋白表达PKC一抗稀释倍数(1∶100)，染色步骤如下:切片脱蜡入水。3%H2O2室温孵育1min,以灭活内源性酶。最后蒸馏水洗3次。将切片浸入TAB(0.05mol/L，pH7.4)中,电炉加热至100℃,持续30min。冷却后进行

6、下一步。滴加抗原修复液,.freelin，蒸馏水洗3次。滴加正常5%山羊血清封闭液,室温孵育10min，甩去多余液体。滴加稀释的一抗,4℃湿盒内过夜。TAB洗涤3次,每次5min,滴加二抗室温孵育30min。TAB洗涤3次，5min/次，滴加三抗(HIGH-SABC)室温孵育30min。TAB洗涤3次，5min/次，DAB显色。自来水冲洗，苏木复染，封片。1.4观察方法及判断标准根据文献［7］加以改进。切片中出现黄染为阳性。每张切片由两位观察者独立计数,随机取染色区域4个高倍视野(×400)阳性细胞平均数,用半定量计分。染色强度用0～3级计分：

7、0级为无染色；1级为轻度阳性染色；2级为中度阳性染色；3级为强阳性染色；染色范围根据细胞阳性染色的百分数而分为0～4级：0级为无染色；1级为5％～10％细胞染色；2级为10％～20％细胞染色；3级为20％～50％细胞染色；4级为50％细胞染色。染色总评分为染色强度+染色范围。1.5统计学处理方法数据用±s表示,组间差异性比较采用q检验，P0.05认为有显著性差异。2结果PKC在正常组中主要存在于胞浆,其他组别中,除了胞浆外，在胞膜和胞核也可见。自然恢复组较对照组PKC表达增强,有非常显著性差异(P0.01)；各治疗组较对照组PKC表达增强,但没

8、有显著性差异(P0.05)；各治疗组较自然恢复组PKC表达下调,有显著性差异(P0.05)；各治疗组之间比较没有显著性差异(P0.05)。结果见表1。