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《益气化瘀中药对大鼠胃癌前病变蛋白激酶c及细胞周期素e蛋白表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、益气化瘀中药对大鼠胃癌前病变蛋白激酶C及细胞周期素E蛋白表达的影响论文.freelodelofGPLainlythroughN-methyl-N-nitroN-nitrosoguanidine(MNNG)togetherulationandunduehungerandovereating.Thesurvivedratsaftermodelinglydividedintospontaneousrecovery,andhigh-,moderate-andloent,theexpressionofPKCandCyclinEmunohistochemicalmethodineachg
2、roup.ResultsTheexpressionofPKCandCyclinEintrementgroupentofratsL。1.2造模及给药选用SPF级6周龄SD雄性大鼠62只,体质量100～120g。造模参照严氏等1-3综合造模方法并加以改进。大鼠自购进后适应性喂养1d。从62只大鼠中随机抽取13只作为正常组,其余49只用于造模。正常组大鼠不做任何处理；造模大鼠每日自由饮用100mg/LMNNG液(饮料瓶用油漆涂黑避光)、进食含0.3g/L雷尼替丁的纯鼠饲料、上午用56℃150g/L的氯化钠液按10mL/kg灌胃,进食2d,禁食ld,进食当天下午用8.5g/L脱氧胆酸
3、钠溶液按l0mL/kg灌胃,禁食当天下午用400mL/L乙醇按l0mL/kg灌胃,连续24周。24周末时随机抽取正常组和造模大鼠各1只,杀检,观察组织病理学变化(以HE染色光学显微镜下观察的结果为主),确认模型是否成功。造模型成功后,将造模存活的48只大鼠随机分为自然恢复组l2只,中药高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)各12只。高剂量组每日每只按20g/kg(相当于成人1d用量的2倍)灌胃,中剂量组按10g/kg(相当于成人1d用量)灌胃,低剂量组按5g/kg(相当于成人1d用量的一半)灌胃。治疗16周。自然恢复组同正常组大鼠常规饮食。40周末所有动物禁食1d,处死,剖
4、腹取胃,沿胃大弯剪开,生理盐水冲洗,肉眼观察,平铺于硬纸板上,于胃窦部剪取组织1块,40g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片5mm,免疫组织化学染色。1.3检测方法及判断标准免疫组织化学用SP法,按试剂说明书操作,DAB显色,PBS代替一抗作阴性对照,已知阳性切片作阳性对照。CyclinE定位于细胞核,免疫组化染色阳性信号为棕色和棕黄色；PKC主要存在于胞浆,免疫组化染色阳性信号为黄色。CyclinE每张切片随机选取4个400高倍视野。“-”：无阳性细胞或阳性细胞数5%；“+”：阳性细胞数5%～20%；“++”：阳性细胞数20%～60%；“+++”：阳性细胞数≥60%。PKC每
5、张切片随机取染色区域4个高倍视野阳性细胞平均数,用半定量计分4。染色强度用0～3级计分：0为无染色；1为轻度阳性染色；2为中度阳性染色；3为强阳性染色。染色范围根据细胞阳性染色的百分数分为0～4级：0为无染色；1为5%～10%细胞染色；2为10%～20%细胞染色；3为20%～50%细胞染色；4为50%细胞染色。染色总评分为染色强度＋染色范围。1.4统计学方法计数资料用卡方检验,计量资料用t检验,数据用x±s表示,P0.05认为有显著性意义。2结果(见表1、表2)表1各组大鼠PKC蛋白表达情况(略)注：与自然恢复组比较,*P0.05；与正常组比较,#P0.01；自然恢复组死亡2
6、只,不纳入统计(下同)表2各组大鼠CyclinE蛋白表达情况(略)3讨论PKC是1977年由日本学者Nishizuka等首次在鼠脑的胞质成分中发现的一种依赖磷脂和钙的蛋白激酶,其广泛分布于真核细胞中,由多种具有不同生物学特性的同工酶组成,是细胞内信号传导的重要递质。PKC通常处于失活状态,被激活后可由细胞质转位到细胞膜,能够使众多蛋白质中的丝氨酸和苏氨酸发生磷酸化而发挥作用。因此,PKC的活化不仅与正常细胞和异常细胞的生长、分化、凋亡等多种生物学效应有关,更在肿瘤的发生、发展、转移和多药耐药等方面发挥重要作用。有人采用不同浓度的PKC抑制剂Staurosporine(ST)作
7、用于人胃癌细胞株MGC803和SGC7901后,细胞增殖受到明显抑制,表明PKC在胃癌细胞增殖中具有重要作用5。胃癌细胞增殖时,PKC活性表现为上调趋势,而诱导胃癌细胞凋亡时,它表现为下调趋势5-7,一些化疗药物和抑制增殖及诱导凋亡的药物如特异性环氧化酶2抑制剂也通过下调PKC活性而抑制胃癌细胞生长8-9。CyclinE是细胞周期G1/S期转移调控的一个正性调控因子,在细胞周期中含量是呈周期性变化的细胞周期调控蛋白10。异常情况下CyclinE蛋白失去周期性表达,而在整个细胞周期中表达水平高,则可使细胞
