tgf-β1对mscs体外模拟缺血性损伤的保护作用　

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1、TGF-P1对MSCs体外模拟缺血性损伤的保护作用【摘要】目的观察转化生长因子31(TGF-31)对骨髓间充质干细胞(MSCs)体外模拟缺血性损伤的保护作用。方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠MSCs,对培养第3代的MSCs进行鉴定；用1、2、5yg/L的TGF-31分别预处理细胞8h，然后用血清剥夺和低氧(SOD)处理建立MSCs体外模拟缺血性损伤模型，通过流式细胞术评价MSCs的凋亡及存活情况；用Westernblot方法检测2ug/L的TGF-31对Akt和p-Akt表达的影响。结果密度梯度离心结合贴壁法

2、能有效分离、纯化大鼠MSCs，免疫荧光检测显示培养的细胞CD29表达阳性，而CD34表达阴性。用2ug/L的TGF-31预处理MSCs后，可抑制S0D诱导的细胞凋亡，其早期凋亡率和中晚期凋亡率均明显下降，与凋亡模型组相比差异具有显著性(F=、，P[ABSTRACT]ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofTGF-0lonmesenchymalstemcells(MSCs)injurycausedbyanalogousischemiaingradientcentrifugali

3、zation(DGC)combinedwithadherencemethodwereusedtosegregateandcultivateratMSCs.MSCscultivatedtothe3rdpassagewerecharacterizedusingflowcytometrytechnique.TGF-3lwithl,2and5ug/LwerepretreatedonMSCsfor8h,thenserumandoxygendeprivationwereusedtocauseanalogousischemiaofMS

4、Csinvitro.AnnexinV/PIf1owcytometrytechniquewasusedtoevaluateapoptosisandsurvivalofMSCs.WesternblottechniquewasusedtodetecttheexpressionofAktandp-Aktwhen2yg/LTGF-01waspretreatedoncombinedwithadherencemethodcouldsegregateandpurifyratMSCseffeetively.Theresultsofflow

5、eytometryshowedthatCD29expressionwaspositivewhileCD34expressionnegativeforMSCs.Theresu1tsofAnnexinV/PIflowcytometryshowedthenumberofapoptosiscellof2ug/LTGF-3lpretreatingonMSCswassignificantlylessthanthatofMSCsafter6hserumandoxygendeprivation.Westernblottechniques

6、howedthattheratioofp-AkttoAktincreasedafterpretreatedby2yg/LTGF-131，p—Akt/Aktat8hwasobviouslyhigherthanthatofthoseatothertimes(P见表1。Wortmannin抑制TGF_01的抗凋亡作用2ug/LTGF-31处理2、4、6、8、12、24hMSCsp-Akt/Akt比值分别为土、土、土、土、士、士，p-Akt表达在2h时开始升高，8h达到高峰，其后表达逐渐降低，TGF-31处理8h时p-Akt/A

7、kt比值与其他时间点相比差异具有显著性(F=，PTGF-P1对MSCs体外模拟缺血性损伤的保护作用在MSCs移植治疗神经系统疾病的研宄中，对脑缺血的治疗研宄最多。导致神经细胞凋亡和坏死的脑缺血恶劣的病理生理环境，必然对MSCs存活及发挥其治疗功效构成极大的威胁。本研究参照ZHU等［4］的方法以S0D处理来模拟脑内缺血，可观察到MSCs的活细胞数在无血清和低氧刺激最初的6h内急剧下降，细胞死亡的主要形式是细胞早期凋亡(AnnexinV+/PI_)。表明在细胞移植后的初期，细胞在环境的刺激下表现为凋亡。如果细胞的恶劣环境得不

8、到及时的改善，细胞将进入不可逆的细胞坏死。在细胞移植的临床研究应用中，对细胞采取保护性预处理，可以防止细胞的凋亡，提高细胞移植后的存活率。本研究将不同浓度的TGF-31预处理MSCs8h,发现使用2ug/LTGF-31可以明显降低无血清低氧MSCs的早期和中晚期凋亡率，对MSCs体外模拟缺血性损伤具有保护作用。PI3