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时间:2018-11-18
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1、RECK在宫颈癌中的表达及意义论文王玲韩丽英王强李荷莲【摘要】目的检测基质金属蛋白酶抑制剂RECK在宫颈癌组织中的表达,探讨其对血管生成的影响。方法实验组(宫颈癌组织)26例以及对照组(正常宫颈上皮、慢性宫颈炎组织)24例,应用SP免疫组化法,经细胞计数及灰度测量检测RECK的表达,计数微血管密度(MVD)的值。比较二者的差异性。结果RECK的表达在实验组的灰度值(7848.74±1276.04)明显低于对照组(657282.8±30681.16)(P0.05);RECK在宫颈癌中表达与肌层浸润深度、盆腔淋巴结转移有关(P0.05),而与临床分期、组
2、织学分型、组织学分级、脉管浸润无关(P0.05)。MVD值在实验组(19.4615±3.0718)明显高于对照组(12.0000±2.6629)(P0.05);二者呈负相关关系,r=-0.397,.freelotifs)基因是近年来发现的新型MMP抑制剂.freel3大小组织,投入10%甲醛溶液中,4℃保存,供制备光镜标本用。组织经固定、脱水、包埋、5μm连续切片。1.3.2实验方法将切片进行HE染色和SP免疫组化。用Imageproplus6.0做灰度分析(IOD),半定量计量RECK阳性率及IOD值,计数MVD值。1.3.3结果判定①RECK细
3、胞计数判断标准:400倍镜下观察,在肿瘤细胞膜和/或细胞质有黄棕色或玫瑰红色颗粒沉着为RECK阳性染色。根据染色程度和染色细胞百分率进行评分:基本不着色为0分,淡为1分,适中为2分,深为3分;着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,≥51%为3分。将平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分相乘为其最后得分:≤1分为阴性(-),2~3分为(+),4~6分为(),6分为()。②MVD计数结果判定标准:细胞间质内孤立的棕黄色血管内皮细胞或细胞簇或血管腔内径小于8个红细胞直径且管壁无肌层者代表1条单独的微血管。先在低
4、倍(×100)视野下找到肿瘤组织内微血管密度最高的区域(热点),然后在高倍(×400)视野下计数5个视野的微血管数,取其平均值。1.4统计学方法使用SPSS11.0进行数据分析,RECK检测结果细胞计数以(-~)表示,灰度分析以IOD均值及标准差表示,MVD结果以均值及标准差表示。组间进行独立样本χ2检验、t检验及双变量相关性分析。2结果2.1宫颈癌组织及对照组中RECK的表达RECK在胞浆和胞膜处表达明显,宫颈间质中有适度表达,呈广泛性弥漫(见图1)。RECK在宫颈癌组织中阳性表达11例(42.31%),而在对照组中呈高表达,阳性表达22例(91.
5、67%),组间比较有显著性差异(P=0.0002)。26例宫颈癌组织IOD为7848.74±1276.04,24例对照组为657282.8±30681.16,经t′检验,宫颈癌组IOD值低于对照组,差异有统计学意义(t′=2.5705,P=0.000)(见表1)。两种方法检验结果一致。2.2宫颈癌组织中RECK表达与肌层浸润和淋巴结转移的关系经组间χ2检验,RECK在宫颈癌中表达与肌层浸润深度、盆腔淋巴结转移有关(P0.05),而与FIGO分期、组织学分级和组织学分型无关(P0.05)。深肌层间质浸润、有盆腔淋巴结转移者,其RECK阳性表达率分别显著低
6、于浅肌层浸润、无盆腔淋巴结转移者(P=0.0184;P=0.0237)。不同病理参数下RECK表达见表2。表1两组RECK的表达表2RECK的表达与宫颈癌临床病理参数的关系2.3宫颈癌MVD的表达情况及与RECK的相关性分析镜下观察血管染色结果,在宫颈癌组织中,微血管排列紊乱,着色不均一,大小不等,形状不规则,血管壁厚度不均(见图2),而对照组中血管内皮细胞表达较清晰,形状规则,呈圆形或椭圆形,管壁厚度均匀。宫颈癌组中MVD明显高于对照组(P=0.0000)。经线性回归分析,26例宫颈癌组织RECK表达与MVD值呈负相关(r=-0.397,P=0.04
7、95)(见表3)。表3宫颈癌和对照组中MVD的表达及与REOK的相关性分析3讨论RECK基因是由日本学者ChiakiTakahashi等人在转染了vKiRas基因的NIH3T3细胞系表达的cDNA中分离出来的转录抑制基因。在正常组织或无肿瘤细胞系中广泛表达,而在癌基因转染的成纤维细胞或肿瘤细胞中低表达或无表达。RECK在转录后水平抑制MMP(特别是MMP2、MMP9、MT1MMP)的分泌与活性,还可以抑制proMMP9和proMMP2从细胞内的释放,从而抑制肿瘤的血管生成、浸润和转移〔4〕。RECK在正常组织中高表达,而在各种肿瘤来源
8、的细胞系及转染了Ras等癌基因的细胞中不表达。本研究表明,RECK表达呈弥散状,呈棕黄色或棕褐
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