细胞因子对牛体外受精胚胎细胞凋亡的影响-硕士论

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1、分类号S823学校代码10129UDC636学号08201009细胞因子对牛体外受精胚胎细胞凋亡的影响EffectofCytokinesonCellApoptosisofBovineInVitroFertilized(IVF)Embryos申请人：苏米雅学科门类：农学学科专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：动物繁殖生物学与繁殖技术指导教师：张家新教授论文提交日期：二〇一一年五月0要本研究通过在牛卵母细胞成熟液和胚胎发育液中添加不同浓度的表皮生长因子（EGF）和半胱胺（CYS），比较其对牛卵母细胞成熟和胚胎发育的影响，利用TUNEL检测法，检测了不同

2、处理条件下胚胎细胞的凋亡情况。为牛卵母细胞和胚胎体外发育的提高提供理论基础。研究结果如下：试验一，研究了牛体外受精胚胎在不同发育阶段的细胞凋亡情况。结果表明，对于牛体外受精胚胎，凋亡信号最早出现于16细胞期，随着胚胎的发育，凋亡发生比率也增加。16细胞凋亡率为26%，桑葚胚凋亡率为83%，囊胚为97%,扩展囊胚和孵化囊胚为100%。在囊胚阶段，细胞凋亡指数也随发育进行呈现上升趋势（囊胚凋亡指数为0.031，扩展囊胚为0.066,孵化囊胚为0.105）。试验二，比较不同浓度EGF或CYS对牛卵母细胞成熟的影响。结果表明50ng/mlEGF显著提高卵

3、母细胞的卵裂率。说明EGF对卵母细胞成熟有促进作用。在成熟液中添加CYS对卵母细胞卵裂率和囊胚率没有显著影响，但50ng/ml浓度EGF和100uM浓度CYS处理组的囊胚凋亡指数都显著低于对照组(0.057,0.058v.0.071)，说明成熟液添加适当浓度EGF或CYS能够显著提高牛卵母细胞的质量。试验三，比较了在牛胚胎发育液中添加不同浓度EGF或CYS的效果。结果表明EGF对牛胚胎体外发育没有明显影响。在胚胎发育液中添加100uMCYS可以明显提高胚胎发育能力，囊胚率显著高于对照组（36.5v.29.4,P<0.05），囊胚的凋亡指数显著低于

4、其他组(0.058v.0.069,0.070,0.071,0.073,P<0.05)。说明CYS对牛胚胎体外发育有明显促进作用。试验四，比较了在牛卵母细胞成熟液和胚胎发育液中同时添加EGF或CYS的效果。结果表明，同时添加EGF或CYS对牛卵母细胞的成熟及胚胎的发育没有产生叠加效应。以上结果表明，（1）牛体外受精胚胎，凋亡信号最早出现于16细胞期，随着胚胎的发育，凋亡发生比率也增加。（2）EGF和CYS可以促进卵母细胞成熟。（3）EGF对牛胚胎体外发育没有明显影响。CYS可以提高牛胚胎体外发育能力。（4）在成熟液和发育液中同时添加EGF和CYS可

5、以提高牛卵母细胞成熟和胚胎的发育，但不产生叠加效应。关键词：牛；体外受精胚胎；细胞凋亡；细胞因子EffectofCytokinesonCellApoptosisofBovineInVitroFertilized(IVF)EmbryosAbstractInthisstudy,developmentofoocyteandembryoofbovinewereexaminedafterepidermalgrowthfactor(EGF)andcysteamine(CYS)weresupplementedininvitromaturationmediuma

6、ndembryoculturemedium,cellapoptosisofembryounderdifferenttreatmentconditionsweredetectedusingTUNELfluorescencemethod.Thepurposeofthisstudyistoimprovebovineoocytematurationandembryodevelopment.Theresultsareasfollows:Inexperimentone,cellapoptosisofbovineinvitrofertilizedembryoa

7、tdifferentdevelopmentalstagesweredetected.Theresultsshowedthatapoptosissignalfirstappearedinthe16-cellstage,andapoptosisrateswasincreasedwithembryodevelopment.Theapoptosisratewas26%in16-cellembryo,83%inmorula,97%inblastocystsand100%inexpandedblastocystsandhatchingblastocysts.

8、Inblastocystsstage,cellapoptosisindexwereincreasedwithembryodevelopm