超声波辅助提取远东疣柄牛肝菌菌丝体色素研究

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1、超声波辅助提取远东疣柄牛肝菌菌丝体色素研究超声波辅助提取远东疣柄牛肝菌菌丝体色素研究　远东疣柄牛肝菌（Leccinumextremiorientale）隶属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、牛肝菌科、疣柄牛肝菌属[1]，菌体可食，美味滑口[2]，已从子实体中分离出麦角甾醇等13种化合物[3]。超声提取法是一种利用外场介入强化提取过程，利用空化作用、机械作用和热效应在溶媒中进行天然产物活性成分提取的方法[4]。采用超声波技术，.Loder481型摇床，FisherScientific有限公司。葡萄糖、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚（沸程60~90℃）均为国产分

2、析纯。　　1.2试验方法　　1.2.1菌丝体的制备。将保藏菌株接种至活化培养基上于27℃培养6d，打取菌丝块于装有100mL种子培养基的250mL三角瓶中，27℃、140r/min培养60h，以10%的接种量接到装有100mL发酵培养基的250mL三角瓶中，27℃、140r/min培养96h。发酵液离心5000r/min、20min，去离子水洗涤菌丝体2次，收集菌丝体，50℃真空干燥，粉碎至60目保存备用。　　1.2.2提取溶剂及检测波长选择。精确称取菌丝粉0.200g，分别用15mL蒸馏水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚（沸程60~90℃）溶于三角瓶中，室温下

3、浸提24h，离心5000r/min、20min，取上清液，以提取剂为空白，在300~600nm进行紫外可见光谱扫描，确定最大吸收波长，找出最佳提取溶剂。　　1.2.3单因素试验。精确称取菌丝粉0.200g，置于50mL离心管中，加入适当的提取溶剂，超声波破碎提取，提取液离心5000r/min、20min，取上清液稀释10倍，以提取剂为空白，以410nm处的吸光度值评价提取效果。　　（1）乙醇浓度对色素提取效果的影响。在液料比75mL/g，超声波功率300in，研究乙醇浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%、100%时对色素提取效果的影响。　　（2）液料比对

4、色素提取效果的影响。在乙醇浓度90%，超声波功率300in，研究液料比分别为25、50、75、100、125、150mL/g时对色素提取效果的影响。　　（3）超声波功率对色素提取效果的影响。在乙醇浓度90%，液料比75mL/g，提取温度60℃，提取时间40min，研究超声波功率分别为150、200、250、300、350、400L/g，超声波功率300in时对色素提取效果的影响。　　（5）提取温度对色素提取效果的影响。在乙醇浓度90%，液料比75mL/g，超声波功率300in，研究提取温度分别为30、40、50、60、70、80、90℃时对色素提取效果的影响。　　1

5、.2.4正交试验确定最佳提取工艺。鉴于乙醇浓度、液料比、超声波功率、提取时间、提取温度对远东疣柄牛肝菌菌丝体色素的提取均有一定的影响，通过L16（45）正交试验确定最优的提取条件（表1）。　　　　　　2结果与分析　2.1提取溶剂及检测波长的选择　　远东疣柄牛肝菌菌丝体色素易溶于蒸馏水、甲醇、乙醇、丙酮等强极性溶剂，部分溶于乙酸乙酯，在石油醚中几乎不溶。由图1可知，远东疣.L.柄牛肝菌菌丝体色素溶液在近紫外光区374～376nm有一吸收峰，在可见光区410~416nm有一吸收峰，色素浓度与410nm处吸收峰的峰高成正比，因此可根据色素溶液在410nm处的吸光度值评价提

6、取效果。在410～416nm区域，甲醇的吸收峰最高，其次是乙醇的。由于甲醇有一定毒性，故采用乙醇作为该色素的提取溶剂。　　　　2.2单因素试验　　2.2.1乙醇浓度对色素提取效果的影响。由图2可知，乙醇浓度在50%～90%时，色素溶液的吸光度值随乙醇浓度的增加而增加，当乙醇浓度超过90%时，吸光度值急剧下降。可能是由于乙醇浓度的升高，对天然产物如糖类、蛋白质等的溶解性降低，对色素的溶解性增加；但乙醇浓度过高，会使菌丝体细胞膜蛋白质变性，阻止后续乙醇进入细胞，影响提取效果。　　2.2.2液料比对色素提取效果的影响。从传质效率的角度看，液料比主要体现在影响固相主体和液相

7、主体间的浓度差，即传质推动力[5]。由图3可知，色素溶液的吸光度值随溶剂质量的增加而增加，但液料比超过75mL/g后则逐渐降低，可能是由于液料比的提高加强了传质推动力，但过量溶剂的稀释又降低了色素溶液的吸光度值。　　2.2.3超声波功率对色素提取效果的影响。由图4可知，超声波功率对色素提取效果的影响不大，随着超声波功率的增加，色素溶液的吸光度值略有升高，当超过300in左右为宜。　　2.2.5提取温度对色素提取效果的影响。由图6可知，提取温度在50～60℃时，色素溶液的吸光度值最大。这是由于提取温度较低时，色素提取速度较慢，提取温度提高提取速度加快，但提取温度过