chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究

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1、Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究作者：龚辉，刘文励，周剑峰，冉丹，徐慧珍【摘要】为了探讨急性白血病（AL）患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义，对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞，用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达，并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明：免疫组织化学和RT-PCR分析显示，28例急性髓细胞白血病（AML）中的15例，18例急性淋巴细胞白血病（ALL）中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降，同时Chfr基因表

2、达异常病例染色体检查存在核型异常。结论：急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损，可能在白血病发病中具有重要作用。【关键词】急性白血病　　AnalysisofExpressionofMitosisCheckpointGeneChfrinBoneMarroiaPatients　　AbstractThisstudyitosischeckpointgenechfrexpressioninacuteleukemia(AL).2mlofbonemarroeachof46ALpatientsand10normaldonorsascontrola

3、ndthEirmononuclearcellsmunohistochemistry.Normalcontrolbloodsamplesphocyticleukemiaand13outof18casesofacutelymphocyticleukemiaexpressionofchfrgenemRNAandproteinsignificantlydecreasedasparedalchromosome.Inconclusion，Chfrgeneisaleukemia-relatedgeneandmayplayanimportantroleinle

4、ukemiapathogenesis.　　Keyia；mitosischeckpoint；Chfrgene；bonemarroitosischeckpointgene）都不能很好地解释其与癌症发生之间的关系，Chfr是Scolnick等［1］于2000年发现的一个M前期检查点基因，定位于12q24.33。细胞存在有丝分裂应激时，Chfr通路激活延迟染色体凝集。目前认为chfr基因可能控制着最初的癌变过程，有作者［2-4］相继证实，Chfr基因与肿瘤相关，但与人急性白血病(AL)发病之间的关系目前不清楚。我们分析了46例急性白血病患者骨髓单个核细

5、胞中Chfr基因的表达及可能的作用。　　材料和方法　　细胞系与病例　　白血病细胞系HL-60由同济医院肿瘤生物医学中心马丁教授惠赠。培养于含10％小牛血清的RPMI1640培养液，置37℃，5％CO2培养箱中培养。46例AL患者骨髓细胞标本来自本院血液内科住院初诊未治疗患者，诊断按张之南主编《血液病诊断及疗效判断标准》。其中AML28例，ALL18例，男24例，女22例，中位年龄32岁。按标准方案化疗判断疗效，分A、B两组，A组为部分缓解及未缓解，B组　　为完全缓解。10例正常人骨髓来源于异基因骨髓移植的正常供者。　　RNA提取及RT-PCR　

6、　AL患者于治疗前抽取骨髓3ml，肝素抗凝，用Ficoll分离液分离出BMMNC。取BMMNC（1×106）细胞，应用TRIZOL试剂盒提取细胞总RNA，用AMV逆转录试剂盒合成cDNA，在20μl总反应体积中含3μl总RNA，42℃孵育1小时，65℃灭活AMV5分钟，-20℃保存。RT-PCR试剂盒购自华美公司；PCR标准参照物(DGL-2000，北京鼎国公司)。TRIZOL试剂购自Gibco公司。PCR同时扩增Chfr和GAPDH，引物序列：参考.L.编辑。　　统计学处理　　RT-PCR数据用x±SD表示，经SPSS10.0统计软件分析，免

7、疫组化结果采用秩和检验分析。　　结果　　　BMNC中Chfr基因的mRNA表达水平　　A、B组Chfr的表达结果经统计检验分析显示，A组与正常对照组相比，无显著性差异（t=0.831，P=0.42)；B组与正常对照组相比，有显著性差异（t=2.34，P=0.007）（表1）。28例AML中14例的Chfr基因表达与正常对照组相比显著下降。18例ALL中的13例比值与正常对照组相比显著下降（附图）。Table1.parisonofChfrgeneexpressionlevelsbetalpersons（略）　　BMMNC中Chfr蛋白表达水平　　

8、免疫组织化学染色表明，Chfr在白血病组及对照组BMMNC的胞核与胞质中均有不同程度的表达。作为细胞周期检测点，作用部位在细胞核，胞质表达的意义目前尚