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时间:2018-11-18
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1、Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究作者:龚辉,刘文励,周剑峰,冉丹,徐慧珍【摘要】为了探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义,对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞,用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达,并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明:免疫组织化学和RT-PCR分析显示,28例急性髓细胞白血病(AML)中的15例,18例急性淋巴细胞白血病(ALL)中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降,同时Chfr基因表
2、达异常病例染色体检查存在核型异常。结论:急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损,可能在白血病发病中具有重要作用。【关键词】急性白血病 AnalysisofExpressionofMitosisCheckpointGeneChfrinBoneMarroiaPatients AbstractThisstudyitosischeckpointgenechfrexpressioninacuteleukemia(AL).2mlofbonemarroeachof46ALpatientsand10normaldonorsascontrola
3、ndthEirmononuclearcellsmunohistochemistry.Normalcontrolbloodsamplesphocyticleukemiaand13outof18casesofacutelymphocyticleukemiaexpressionofchfrgenemRNAandproteinsignificantlydecreasedasparedalchromosome.Inconclusion,Chfrgeneisaleukemia-relatedgeneandmayplayanimportantroleinle
4、ukemiapathogenesis. Keyia;mitosischeckpoint;Chfrgene;bonemarroitosischeckpointgene)都不能很好地解释其与癌症发生之间的关系,Chfr是Scolnick等[1]于2000年发现的一个M前期检查点基因,定位于12q24.33。细胞存在有丝分裂应激时,Chfr通路激活延迟染色体凝集。目前认为chfr基因可能控制着最初的癌变过程,有作者[2-4]相继证实,Chfr基因与肿瘤相关,但与人急性白血病(AL)发病之间的关系目前不清楚。我们分析了46例急性白血病患者骨髓单个核细
5、胞中Chfr基因的表达及可能的作用。 材料和方法 细胞系与病例 白血病细胞系HL-60由同济医院肿瘤生物医学中心马丁教授惠赠。培养于含10%小牛血清的RPMI1640培养液,置37℃,5%CO2培养箱中培养。46例AL患者骨髓细胞标本来自本院血液内科住院初诊未治疗患者,诊断按张之南主编《血液病诊断及疗效判断标准》。其中AML28例,ALL18例,男24例,女22例,中位年龄32岁。按标准方案化疗判断疗效,分A、B两组,A组为部分缓解及未缓解,B组 为完全缓解。10例正常人骨髓来源于异基因骨髓移植的正常供者。 RNA提取及RT-PCR
6、 AL患者于治疗前抽取骨髓3ml,肝素抗凝,用Ficoll分离液分离出BMMNC。取BMMNC(1×106)细胞,应用TRIZOL试剂盒提取细胞总RNA,用AMV逆转录试剂盒合成cDNA,在20μl总反应体积中含3μl总RNA,42℃孵育1小时,65℃灭活AMV5分钟,-20℃保存。RT-PCR试剂盒购自华美公司;PCR标准参照物(DGL-2000,北京鼎国公司)。TRIZOL试剂购自Gibco公司。PCR同时扩增Chfr和GAPDH,引物序列:参考.L.编辑。 统计学处理 RT-PCR数据用x±SD表示,经SPSS10.0统计软件分析,免
7、疫组化结果采用秩和检验分析。 结果 BMNC中Chfr基因的mRNA表达水平 A、B组Chfr的表达结果经统计检验分析显示,A组与正常对照组相比,无显著性差异(t=0.831,P=0.42);B组与正常对照组相比,有显著性差异(t=2.34,P=0.007)(表1)。28例AML中14例的Chfr基因表达与正常对照组相比显著下降。18例ALL中的13例比值与正常对照组相比显著下降(附图)。Table1.parisonofChfrgeneexpressionlevelsbetalpersons(略) BMMNC中Chfr蛋白表达水平
8、免疫组织化学染色表明,Chfr在白血病组及对照组BMMNC的胞核与胞质中均有不同程度的表达。作为细胞周期检测点,作用部位在细胞核,胞质表达的意义目前尚
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