毛白杨4cl基因启动子与apx构成与功能研究

《毛白杨4cl基因启动子与apx构成与功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、毛白杨4CL基因启动子与APX构成与功能研究1文献综述1.1植物基因启动子的结构特点和研究方法核心启动子是包含转录起始点及其上游的TATA框（TATA-box)的这段区域。植物基因转录起始点通常为腺噪呤（A)碱基，且两侧多为啼蛇碱基(Joshi,1987)。核心启动子能够起到与RNA聚合酶结合起始基础水平转录的作用。通常将TATA-box上游的保守序列称为上游启动子元件，这些元件的序列和位置影响了转录的水平和基因表达的时空特异性，确保转采精确而有效地起始，并且特异地调控基因的表达。依掘转录模式的差异，人们将启动子分为组成型、诱导型和组织或器官特界型二类(夏江东等,

2、2006)。植物基因工程中，当今运用最频繁的是组成型动子，但是随着对启动子功能研究的深入和对转基因植物生物安全性要求的提高，组成型启动子因其在植物的生长发育中的潜在风险而逐渐在实践应用中地位下降，而诱导型或组织特异型启动子的使用频率逐渐提升。组成型启动子（constitutivepromoter)驱动的基因表达不具有组织特异性和发育阶段特异性。组成型启动子在表达时间上具有持续性，表达量也相对恒定。植物基因工程中研究和应用最早、最广泛的是源自花椰菜花叶病毒的CaMV35S启动子。CaMV35SMl动子利乂是一个组成型启动了，也足一个强启动子，能在双子叶植物的各个时期

3、启动外源基因在其大多数器1Y高强度表达(Odelletal,1985)，也可以驱动基因在单子叶植物的植株以及叶植物和双子叶植物的原生质体中表达(Benfeyetal.,1990)。1.2木质素和类黄酮概述1.2.1木质素木质素（lignin)是类苯丙酸途径产生的单体衍生形成的高分子化合物，广泛存在于蕨类植物、裸子植物和被子植物中，在木本植物中含量很高(Amther,2003)。苯丙烧是组成木质素的基本物质，其衍生的三种不同类苯丙酸化合物是木质素的基木结构中元，称为木质素牟体或单木质醇（monolignol)，它们聚合形成木质素(Baucheretal.,1998;

4、Boerjanetal.,2003;D18-T购自尘生物公司，植物双元表达载体pBUOl由本验室保存。大肠奸菌五.CO//JM109由本实验室保存称取1.0g电泳级琼脂糖，加入100mL1XTAE电泳缓冲液，用微波炉助溶。待胶冷却至65°C左右，倒入已封好的凝胶灌制平台形成约3?5mm厚的均勻胶层，插上样品梳，待胶凝固后，小心拔出梳子，除去封带，放入电泳槽中，将TAE电泳缓冲液倒入电泳槽至高出凝胶表面2?3mm。在点样孔中加入上样缓冲液与样品的混合物，一个孔中加入DNAmarker。接通电源，在1.V/cm凝胶的电压下进行电泳。电泳结束后将凝胶放入0.5k

5、ig/mL溴化乙锭（EB)中染色10mill左右，取出置于紫外凝胶成像仪中，在254nm紫外灯下进行观察并拍照。2.2实验结果与分析2.2.1毛白杨基因家族启动子的克隆用转录起始位点的预测程序TSSP和NNPP对每个启动子进行转录起始位点预测。分别找到了位于四个启动子3'端附近的转录起始位点，Pto4CL2p、Pto4CL3p、Pto4CUp起始.点、(+1)碱基为A，Pto4CL5p起始位点、(+1)碱基为C。采用PlantCARE和PLACE数据库对得到的4个启动子序列进行分析，搜索可能存在的顺式作用元件。预测发现，4个启动子中均存在CAAT-box。

6、在Pto4CL2p、Pto4CUp、PtoVCL却的-30K域附近找到了TATA-box，在.Pto4CL5p-64位置也找到了TATA-box的序列，但是距离转果起始位点较远，不符合TATA-box的特点（如图2-5，2-6,2-7,2-8)。3毛闩杨4CL启动子在转基闪烟草中驱动.........363.1材料方法.........363.1.1实验材料.........363.1.1.1植物材料.........363.1.1,2主要仪器设备.........363.2实验结果与分析.........403.3.讨论.........504Pto4CL2p结

7、构和功能域的分析.........534.1材料方法.........534.2实验结果与分析.........584.3讨论.........705毛白抗APX的原核表达及活性测定.........725.1材料方法.........725.2实验结果与分析.........755.3讨论.........868PtoAPX在烟草中过量表达调控抗盐性研究8.1材料方法PtoAPX7iH义植物表达载体由本实验室构建并保存，是将PtoAPX连接入pBI121载体的CaMV35S启动子和Nos终止子之间，替换了原载体中GUS编码基因的位置。烟草转化及鉴定步骤同4.1.

8、2.4..