水曲柳节律基因lhy启动子克隆及功能研究

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2、議Ｖｉ劈誦：．学校代码；１０２２５学号：Ｓ１５４６０学化冷文水＂曲柳节律基因以乃启动子克隆及功能研究王旋指导教师姓名：詹亚光教授东北林业大学申请学位级别：硕±学科专业：森林生物工程论文提交日期：２０巧年４月论文答辩日期；２０１５年６月授予学位单位：东北林业大学授予学位日期：２０巧年６月答辩委员会主席：论文评阅人：ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：Ｓ１５４６０ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｒｅｅ

3、ｏｆＭａ巧ｅｒｇＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＣｉｒｃａｄｉａｎＧｅｎｅＬＨＹＰｒｏｍｏｔｅｒｉｎＦｒａｘｉｎｕｓｍａｎｄｓｈｕｎｃａＣａｎｄｉｄａｓ：ＷａｎｇＸｕａｎＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎＹａｇｕａｎｇｐＡｓｓｏｃ．Ｐｒｏｆ．ＺｅｎＦａｎｓｕｏｉａ化Ｓｕｅｒｖｉｓｏｒ；ＡｇｐＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄｆｏｒ；ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｐｅｃｉａｌｉｔ：ＦｏｒｅｓｔｒｙＢｉｏｅｎｉｎｅｅｒｉｎｇ

4、ｙｇＤａｔ：ｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ２０１５，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ？摘要沁Ｍ－Ｓｗａｎ成Ａｗ／ｍＲｕｐｒ．）本研究Ｗ水曲柳（巧ｍ为材料，运用改良如ｅＦｉｎｄｉｎｇＰＣＲ法分离了Ｚ月７基因启动子序列，并对其顺式作用元件进行分析。构建了植物瞬时表达载ＰＸＧＦＰ－Ｐ－ＬＨＹＰＣＸＧＵＳ－Ｐ－ＬＨＹ体ｐ和植物表达载体ｐ，通过ＧＦＰ检测、ＧＵＳ组织化学染色研究基因启动子的启动活性；通过ＧＦＰ检测、ＧＵＳ

5、酶活力检测、Ｇｔ／Ｓ基因定量分析研究基因启动子对非生物胁迫的响应。研究干旱诱导的水曲柳亲本及杂交Ｆ１代ＤＮＡ甲基化模式的变化，探究其与水曲柳耐旱杂种优势的关系。主要结果如下；１、水曲柳ｚｗｙ基因启动子的克隆及其活牲分析克隆了水曲柳ｉｗｒ基因上游启动子区（１３６０ｂｐ）。生物信息分析表明该启动子中含有重要的转录必备元件（ＴＡＴＡｂｏｘ、ＣＡＡＴｂｏｘ）、逆境调控元件如抗旱响应元件、激素响（）ＡＥ－ＩＡＧ－ｔ应元件（如赤霉素、荣莉酸等的调控元件）、光响应元件（ｂｏｘ、ＢＯＸ、Ｇｍｏｉｆ、－ｅＬＡＭＰｌｅｍ

6、ｅｎｔ等促节律相关的Ｃｉｒｃａｄｉａｎ元件。转化烟草并进行ＧＦＰ检测和ＧＵＳ组织。皆。染色结果显示，基因启动子具有启动活性２、么ＨＹ启动子对非生物胁迫的响应－ＰＸＧＦＰＰ－ＬＨＹ侵染的白枠悬浮细胞ｐ，测定其对非生物胁迫（ＮａＣｌ）下的响应。ＧＦＰ－－，ＰＬＨＹ中的启动子ｉ好检测结果显示重组表达载体ｐＰＸＧＦＰ；ｒ能够启动表达。在非生物胁迫下，，从巧光的明亮程度看启动子仍可启动表达，与对照相比较，在盐胁迫下表达水平相对升高了。ＣＸＧＵＳ－Ｐ－ＬＨＹ侵染的烟草植株押，测定其对非生物胁迫（ＮａＣｌ、ＰＥＧ）

7、下的响应。／ＧＵＳ酶活力和ＧＵＳ基因转录表达的定量分析显示，ＧＵＳ酶活力／ＧＬ５基因相对表达量随着干旱、盐胁迫时间的增加先升高后降低，在干旱胁迫３ｈ的时候ＧＵＳ酶活力／Ｇｆ／Ｓ基因相对表达量最高，在盐胁迫６ｈ的时候ＧＵＳ酶活力／ＧＵＳ基因相对表达量最高，高于对照组。说明在非生物胁迫下，肩动子仍可启动表达。且Ｚ／／Ｆ基因启动子中的逆境调控元件对非生物胁迫产生了响应。３、节律基因ＺＪ７Ｆ后动子区及编码区甲基化分析Ｗ干旱处理的父本、母本、杂交子巧（水曲柳做母本、大叶白蜡做父本杂交所得的白蜡属种间杂种

8、Ｆ１）水曲柳为材料。用亚硫酸盐处理测序法对ＺＷ基因启动子区及编码区甲基化分析显示，和对照组及处理組亲本相比，只有干旱处理的杂交子代中某些甲基化水平降低且某些原本甲基化的位点发生了去甲基化。基因巧光定量结果显示，干旱胁迫下杂交子代的相对表达量高于亲本。