高效液相色谱法测定复方养血生发片中二苯乙烯苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定复方养血生发片中二苯乙烯苷的含量论文【摘要】高效液相色谱法测定复方养血生发片中何首乌有效成分二苯乙烯苷（2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷）的含量。方法流动相为乙腈1%磷酸(体积比15∶85)；色谱柱为C18柱；紫外检测波长为320nm。结果二苯乙烯苷在1.04～3.64μg范围内具有良好的线性关系；平均回收率为99.36%，RSD为0.41%（n=9）。结论该方法灵敏度、专属性高、重现性好，快速简便。【关键词】高效液相色谱法二苯乙烯苷复方养血生发片Abstract:ObjectiveTodeterminatetheconte

2、ntofstilbeneglycoside,anactiveingredientofPolygonummultiflorum,inthepoundYangxueshengfatabletsbyHPLC.MethodsThemobilephaseconsistedofacetonitrile1%phosphoricacid(15∶85).Thecolumnn.AUVdetectorployedandthedetection.Results2,3,5,4’tetrahydroxystilbene2OβDglucosidehasagoodlinearityL.

3、Theaveragerecoveryethodisrapid,selectiveandreproducible.Keyp高压梯度泵.freelanagementsoftnC18分析柱（5μm，3.9mm×150mm）；流动相：乙腈0.1%磷酸水溶液（体积比20∶80）；流速：1.0mL/min；检测波长：320nm；理论板数不低于3000。2．2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉约0.5g，置三角瓶中，加甲醇50mL，加热回流60min，滤过，用少量甲醇洗涤，合并滤液和洗液，挥干，残渣加水10mL使溶解，乙醚萃取两次，每次20mL，水层加饱和正

4、丁醇萃取4次，每次15mL,合并正丁醇液，挥干，用流动相溶解，并转移至10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。2．3对照品溶液的制备精密称取二苯乙烯苷对照品适量，用流动相稀释制成每1mL含0.26mg的溶液，即得。2．4线性试验精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液（0.26mg/mL），用流动相稀释成每1mL含二苯乙烯苷0.052、0.078、0.104、0.156、0.182mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样20μL进行测定。以峰面积积分值（A）为纵坐标，二苯乙烯苷的量（m）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A＝1.778×106m+6.958×104，r

5、＝0.9995。表明二苯乙烯苷在1.04～3.64μg范围内具有良好的线性关系。2．5稳定性试验取供试品溶液分别于0、2、4、8、24h进样测定，结果平均质量分数为0.210mg/g，RSD=1.85%，表明样品在24h内稳定。2．6精密度试验精密吸取对照品溶液20μL，重复进样5次，测定其峰面积,结果平均峰面积为456799.6，RSD=0.72%。2.7重复性试验配制同一批号样品5份，分别进样测定，结果平均质量分数为1.4055mg/g，RSD=1.85%。2.8回收率试验采用加样回收法，精密称取已知含量样品(1.4055mg/g)0.40g，定量分别加入浓度为0.

6、40、0.50、0.60mg/mL的二苯乙烯苷对照品溶液各1mL，按“2.1”项下方法进样20μL进行测定，计算回收率，结果平均回收率为99.36%，RSD＝0.41%，见表1。2.9样品测定分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液20μL，按“2.1”项下色谱条件测定，计算二苯乙烯苷含量。结果见表2。3讨论3.1检测波长的选择参照《中国药典2000版》中何首乌药材的含量测定方法选用320nm为检测波长表1二苯乙烯苷回收率试验测定结果表26批样品含量测定结果3.2提取方法的选择比较了用甲醇为溶剂超声波处理30min、加热回流30min、索氏回流4h3种方法，甲醇加热回流所制备

7、的供试品溶液二苯乙烯苷含量较高，故选择加热回流作为提取方法。3.3提取时间的选择通过对加热回流提取30min,60min,90min的比较，提取60min，含量测定值较高，故提取时间选择为60min。3.4纯化方法的选择比较了用甲醇提取后直接进样测定，乙醚萃取后再用饱和正丁醇萃取，上氧化铝柱（200目，10g，d=1.5cm），上C18小柱（3g）等多种方法，最后采用乙醚萃取后再用饱和正丁醇萃取的方法。【