降香与红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织angⅱ含量及agt mrna表达的影响

《降香与红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织angⅱ含量及agt mrna表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、降香与红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织AngⅡ含量及AGTmRNA表达的影响【摘要】目的：观察“药对”降香、红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织血管紧张素ⅡAngⅡ含量、血管紧张素原(AGT)mRNA表达的影响，探讨其改善心肌重塑作用机制。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型，分别给予降香、红景天煎剂和卡托普利溶液灌胃，连续6周后取梗塞区心肌，分别用放射免疫法和荧光定量PCR检测心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量。结果：模型组血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量高于假手术组和正常组

2、(P<0.05);药对组、药对联合卡托普利组血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量较模型组降低(P<0.05)，与卡托普利组接近(P>0.05);联合用药组血管紧张素原mRNA含量较药对组降低(P<0.05)。结论：“药对”降香、红景天能够改善心肌梗塞后大鼠心肌重塑，其作用机制可能与降低梗死区心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达有关。【关键词】心肌梗塞心肌重塑降香红景天血管紧张素Ⅱ血管紧张素原心肌重塑系心肌损伤后基因组表达改变，导致分子、细胞和间质的改变，其主要

3、形态学变化表现为梗塞区膨展、心室肥厚和心室总体扩张。急性心肌梗塞后均有不同程度的心肌重塑[1]，且伴随着疾病的发展而进展。心肌重塑的发生与循环和局部肾素血管紧张素醛固酮系统(RAS)的激活有关[2]。本实验拟通过“药对”降香、红景天干预心肌梗塞后大鼠，观察其对梗塞心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量、血管紧张素原(AGT)mRNA表达的影响，探讨其改善心肌梗塞后心肌重塑的作用机制。　　1实验材料　　1.1实验动物SPF级雄性SD大鼠共41只，体重300g±20g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，

4、合格证号SCXK(沪)20030003。　　1.2仪器和试剂心电图机、动物呼吸机、Realtime检测仪，血管紧张素Ⅱ试剂盒(北京北方生物技术研究所)，SuperscriptⅡ反转录酶(广州达晖生物技术有限公司)，逆转录试剂盒(广州达晖生物技术有限公司)，PHY，Tyr和actin引物(上海英俊生物技术有限公司)。　　1.3实验药物及制备降香产自四川，红景天产自西藏，均由上海中医药大学附属普陀医院中药房提供;卡托普利由上海施贵宝公司提供;药物制备：红景天、降香各2kg，先煎红景天1.5小时，后入降香

5、，共煎2次制成药液4000ml(每毫升含生药1g),大鼠灌胃剂量为3g/(kg·d)。卡托普利制成1.515g/L的溶液，灌胃剂量为10.5mg/(kg·d)。　　2实验方法　　2.1动物模型建立大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔麻醉，气管插管后接人工呼吸机辅助呼吸。在左胸第4～5肋骨间作横切口打开胸腔，在肺动脉圆锥与左心耳交界稍下1～2mm处用无创性缝线结扎冠状动脉左前降支，开胸前后即时记录Ⅱ导联心电图，以结扎部位以下心肌变白、搏动减弱且心电图出现ST段弓背向上抬高为造模成功。假手术组开胸后仅在相应部位用无创缝针

6、空穿一次即缝合胸壁。术后庆大霉素预防感染3天。　　2.2分组及给药大鼠随机分为药对组、卡托普利组、联合用药组、模型组、正常对照组，各7只，假手术组6只。药对组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予中药煎剂灌胃;卡托普利组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予卡托普利溶液灌胃;联合用药组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予中药煎剂和卡托普利溶液，分上下午灌胃;模型组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予生理盐水灌胃;假手术组：开胸后不结扎冠状动脉，而以无创缝针在相应部位空穿

7、一次即缝合胸壁，次日起按2ml/300g鼠重给予生理盐水灌胃，以上各组均连续给药6周;正常对照组不给予任何干预，正常饲养6周。6周后处死动物摘取梗塞区心肌，放入冻存管，置液氮中保存备用。　　2.3检测指标及方法　　2.3.1血管紧张素Ⅱ含量采用放射免疫法测定。取梗死心肌组织标本，每100mg组织加生理盐水1ml，低温匀浆，低温高速离心(4000bpm)20min，提取上清液，严格按照血管紧张素试剂盒说明进行操作。　　2.3.2血管紧张素原mRNA表达采用免疫荧光法检测。从基因库中查得大鼠血管紧张素原的基因

8、bank号为BC019496。①靶基因的扩增与纯化：总RNA的抽提，RNA样品定量，逆转录，聚合酶链反应(RTPCR)。②PCR扩增产物的克隆：连接，转化，重组质粒的筛选，基因测序鉴定阳性克隆。③荧光定量PCR：TaqManprobe：TaqManprobe：5′CCATCTACGAGCGGGACTCAGGTGC3′67.62564;Senseprimer：5′CTGAGCAGTCCGTTCCTGTTC3′59.22