人参强心方对慢性心衰大鼠angⅱ及其受体at1 mrna表达的影响

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1、人参强心方对慢性心衰大鼠AngⅡ及其受体AT1mRNA表达的影响作者：邓国兴张金兰高玮韩雪张一昕郭秋红曹丽静【摘要】目的观察人参强心方对慢性心衰大鼠血浆AngⅡ含量与心肌组织AngⅡ受体AT1mRNA表达的影响，揭示人参强心方治疗慢性心衰的作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法复制慢性心衰大鼠模型，随机分为假手术组、模型组、阳性药对照组和人参强心方高、低剂量组。检测大鼠血浆AngⅡ的含量和心肌组织AT1mRNA的表达变化。结果模型组大鼠血浆AngⅡ含量明显增加，心肌组织中AT1mRNA的表达明显增多；给药后，各治

2、疗组大鼠AngⅡ的含量明显减少，AT1mRNA的表达明显降低。结论人参强心方能降低AngⅡ的含量，抑制AT1mRNA的表达，可能是其治疗慢性心衰的分子机制之一。【关键词】人参强心方；心力衰竭；血管紧张素Ⅱ　人参强心方具有益气养阴、活血强心之功，系本课题组经过多年临床筛选出的治疗慢性心衰的效方，既往药效学研究证实该方具有增强心肌收缩力、改善心功能的作用〔1〕，但其作用机制尚不十分清楚。肾素血管紧张素系统(RAS)过度激活在心衰的发生和发展中具有重要的意义，而RAS的各种生理活动主要是通过血管紧张素Ⅱ（Ang

3、Ⅱ）产生的。本研究旨在通过观察人参强心方对心衰大鼠血浆AngⅡ8含量以及心肌组织AngⅡ受体AT1mRNA的表达变化，探讨其作用机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物　　健康雄性SD大鼠60只，体重180～200g，清洁级，由河北省实验动物中心提供。合格证号：SCXK(冀)20031003。　　1.1.2实验药物　　人参强心方由红参、生地黄、蟾酥等药物组成，由河北医科大学中药制剂室制备，每1g相当于生药3.1g。实验时制成所需浓度的水溶液。心宝丸（规格：20粒/瓶，批号：20050916

4、1），汕头市麒麟药业有限公司生产，实验时粉碎，过200目筛，用蒸馏水配成0.024g/ml的混悬液。　　1.1.3实验仪器　　FJ2020型γ8射线免疫计数器（国营262厂）、PE9600型PCR扩增仪（美国PE公司）；电泳仪及电泳槽（北京六一公司）；凝胶图像分析系统（法国VL公司BIOPROFIF）。　　1.1.4主要试剂　　AngⅡ试剂盒和醛固酮（ALD）试剂盒均购自北京东亚免疫技术研究所；TrizolRNA试剂盒购自美国Invitrogen公司；PCR试剂盒购自大连TaKaRa公司。AT1的引物由

5、北京塞百盛基因技术有限公司合成。以GAPDH为内参照。AT1上游引物为5′TCCACCCAATGAAGTCTCGCCT3′，AT1下游引物为5′GCACAATCGCCATAATTATCC3′，扩增片段长度为348bp。GAPDH上游引物为5′CGCTAACATCAAATGGGGTG3′，GAPDH下游引物：5′ACAACCTGGTCCTCAGTGTA3′，扩增片段长度为600bp。　　1.2方法　　1.2.1造模方法　　参照相关文献〔2〕，采用腹主动脉缩窄法复制慢性心衰大鼠模型。大鼠行4%戊

6、巴比妥钠(408mg/kg)腹腔注射麻醉，剑突下腹正中切口，分层打开腹腔，在肾动脉分支以上钝性游离腹主动脉，将7号注射器针头平行置于腹主动脉上，用4号手术丝线将腹主动脉和注射器一同结扎，然后缓慢将注射器撤出，关腹、分层缝合，使大鼠腹主动脉直径缩窄为0.7mm。正常对照组开腹后将手术丝线穿过腹主动脉，除不缩窄腹主动脉外，其他操作与手术组完全相同。　　1.2.2动物分组及给药　　大鼠于清洁级动物实验室内，正常喂养1w后，随机分为5组，每组12只。（1）假手术组；（2）模型组；（3）人参强心方低剂量组，每日用药剂

7、量为1.5g/100g；(4)人参强心方高剂量组：每日用药剂量为3.0g/100g；(5)阳性药（心宝丸）对照组：每日用药剂量为0.24g/kg。各组灌胃1次/d，每次用药体积均按1ml/100g计算。造模4w后，假手术组和模型组灌服蒸馏水，各治疗组灌服治疗药或对照药，共治疗4w。实验8w末于最后一次给药后禁食12h，麻醉状态下股动脉取血2ml，分别置于肝素、EDTA的抗凝试管中，4℃、3000r/min离心，分离血浆，同时切开腹部迅速剖取心脏，液氮冷冻。　　1.2.3检测指标及方法　　1.2.3.1血浆A

8、ngⅡ和ALD的测定　　采用放射免疫法，严格按试剂盒说明书检测。8　　1.2.3.2RTPCR法测定大鼠心肌AT1mRNA表达　　①采用Trizol常规一步法提取总RNA，然后测定RNA样品含量及纯度：A260/A280=1.8～2.0方可使用。②RT反应：取总RNA1μg，加入RT反应体系管（含AMVBuffer，dNTPs，OligodTPrimer，AMV，RnaseInhibitor等），并用DEPC处