脑得生丸中葛根异黄酮的提取工艺研究论文

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1、脑得生丸中葛根异黄酮的提取工艺研究论文李坷平,王俊永,梁生旺【摘要】目的优选脑得生丸中有效成分葛根异黄酮的提取工艺。方法以正交设计安排试验，采用高效液相色谱法测定葛根素和大豆苷的含量，并以此为指标考察溶剂浓度、溶剂用量、提取时间3个因素对异黄酮提取率的影响。结果用12倍量的体积分数为40%的乙醇回流提取2次，每次1h的条件为最佳提取工艺。结论本提取工艺设计合理，稳定，可为脑得生丸的进一步开发提供可靠的实验依据。【关键词】脑得生丸；异黄酮；葛根；大豆苷；提取工艺脑得生丸收载于《中国药典》2005年版一部，由三七、川芎、红花、山楂和葛根等加工而成的蜜丸［１］。

2、具有活血化瘀、疏通经络、醒脑开窍之功效，是治疗脑动脉硬化、脑中风及脑出血后遗症的常用药。葛根为豆科植物野葛［Puerarialobata(；流速1.0mL/min；柱温30℃。2．2对照品溶液的配制精密称取葛根素和大豆苷对照品，分别置10mL容量瓶中，加入甲醇5mL，超声溶解后，用甲醇定容至刻度，制得葛根素质量浓度为0.512mg·mL-1，大豆苷质量浓度为0.925mg·mL-1，密封保存，备用。2．3药材溶液的制备取葛根药材粉末(过3号筛)，精密称定，置锥形瓶中，精密加体积分数为50%的甲醇50mL，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用体

3、积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2．4标准曲线的制备分别精密移取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，2.0mL置10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液。进样体积10μL,按色谱条件测得进样量与峰面积,计算回归方程，结果见表1。表1两种异黄酮的回归方程和线性范围（略）Tab.1RegressionequationsandlinearrangesoftL，定量移取25mL，置1000mL容量瓶中，加体积分数为50%的乙醇至刻度，滤过，取续滤液作为正交试验的供试样品溶液。进样10μL,

4、照“2.1”项下色谱条件测定。由外标法分别计算葛根素和大豆苷含量，两者之和为异黄酮的含量。结果见表3。表2因素和水平表（略）Tab.2Factorsandlevels2．6阴性干扰试验称取红花药材18.2g，加体积分数为40%的乙醇12倍量，回流提取2次，1h/次。以下操作同“2.5”项操作。色谱图见图1。A.对照品;B.供试样品;C.阴性样品1.葛根素;2.大豆苷图1高效液相色谱图（略）Fig.1HPLCchromatograms表3正交实验L9(3)4结果分析表（略）Tab.3AnalysisoftheorthogonalexperimentL9(34

5、）*相当于每克葛根药材中的含量表4方差分析表（略）Tab.4Analysisofvariance3讨论3．1由表3中的R值可看出,影响异黄酮含量提取的主次因素依次为溶剂浓度提取时间溶剂用量。表4的方差分析表明，溶剂浓度对试验有显著性意义，提取时间次之，溶剂用量影响相对较小。但采用低浓度乙醇回流提取时杂质较多，结合生产需要，确定脑得生丸中异黄酮类成分的优选提取工艺为A1B2C2,即：选用12倍量的体积分数为40%的乙醇，回流提取2次，每次1h。按此工艺进行，以葛根素和大豆苷为指标，相对于葛根药材，其异黄酮的转移率可达到90%以上。3．2本研究首次以葛根素和大

6、豆苷为指标，采用高效液相色谱法考察脑得生丸中异黄酮的提取工艺。该方法与文献［6,7］所采用的UV法相比，结果更准确，所优选的提取工艺切实可行。【