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1、东方红豆抗疲劳作用的实验研宄马金荣1朱丽丽2孙秀娥2李沛光3（1白城中心医院吉林白城137000）（2吉林工程技术师范学院/生物与食品工程学院吉林长春130052）（3吉林亚泰明星制药有限公司吉林长春130114）【摘要】目的为了开发、利用红豆资源、对东方红豆进行了抗疲劳作用研究。方法进行东方红豆对小鼠游泳时间、小鼠爬杆时间、血乳酸、血中尿素氮、肝糖原含量和肌糖原含量等的影响实验。结果红豆能增强小鼠游泳耐力、延长爬杆时间，降低血乳酸、血中尿素氮含量，提高肝糖原含量和肌糖原含量。结论东方红豆只有抗疲劳作用。【关键词】东方红豆抗疲劳【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】
2、2095-1752（2012）32-0190-02木实验是通过小鼠游泳试验、爬杆试验以及相应的生化指标:血尿素、血乳酸、肝糖原和肌糖原及脑内谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）含量变化对红豆进行抗疲劳功能的研究。1材料和方法1.1实验动物昆明种雄性小鼠，6—8周龄，体重18-22g。将小鼠随机分为4组，每组12只，组间体重经t检验无显著差异。对照组、低剂量、中剂量组和高剂量组，饲养受试物量分别对应为:0,0.3,0.5和1.5g/kg的东方红豆，对照组给同体积的蒸馏水。每10g体重给药0.2ml。采取灌胃法，连续给予受试物28d后，测定各指标。1.2药品与试剂
3、1.2.1东方红豆由松原郭尔罗斯东方红豆食品开发有限责任公司提供，主要成分为牛.物碱。1.2.2试剂谷氨酸和γ-氨基丁酸（Sigma公司）;丹酰氯（Fluka公司）；尿素氮测定试剂盒（二乙酰一肟法）北京化工厂。其他试剂均为国产分析纯,水为双蒸水。1.3仪器高效液相色谱仪（Waters）;超速离心机（康强，意大利）;752分光光度计。1.4小鼠体力性疲劳模型的制备1.4.1游泳试验末次给予受试物30min后，给小鼠负体重5%重量，将小鼠放于水深不少于30cm,水温25&pluSmn;rC的游泳箱中。记录自游泳开始至头部全部沉入水中8s不能浮出水面的吋间作为小鼠游泳吋间
4、。1.4.2爬杆试验末次给予受试物30min后，将小鼠放在爬杆架的有机玻璃棒上，使其肌肉处于紧张状态，记录小鼠由于肌闪疲劳从冇机玻璃上跌落下来的吋间。第三次跌落吋终止实验，累计三次的吋间作为爬杆吋间。1.5血尿素的测定末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温25±l°C的游泳箱中游泳90min,休息60min后摘眼球取血，取血清用试剂盒（二乙酰-肟法）测定。1.6血乳酸的测定末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温30±l°C的水中负重4%游泳lOmin停止、分别从游泳前、游泳之后0、15、60min的小鼠眼内毗静脉丛取血。于5ml离心管中加入l
5、%NaF溶液0.48ml,准确吸取全血20μl加入试管底部。用试管上清液冲洗微量吸管数次，再加入蛋白沉淀剂1.5ml,振荡混匀,3000r/min离心lOmin,取上清液测定。1.7肝糖原的测定末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温30±l°C的水中游泳60min后停止，立即处死小鼠取出肝脏，精确称取200mg,加入TCA4ml,每管匀浆lmin,3000r/min离心15min,取上清液转移至另一试管内。在沉淀中加入TCA4ml。匀浆lmin,再次离心15min,取上清液,与第一次离心的上清液合并，充分混匀。取lml上清液，每管加入95%的乙醇4ml,
6、充分混匀至两种液体间不留有界面。室温放置过夜。沉淀完全后将试管于3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管放置lOmin,用1ml蒸馏水振荡溶解后测定。1.8肌糖原的测定末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温30±l°C的水中游泳60min后停止，立即处死小鼠取出肌内，以0.9%NaCI溶液冲洗后，用滤纸吸干，准确称取肌肉lg,放入盛有3ml30G%KOH的试管中，置沸水浴煮20min，取出冷却后，将其转移至50ml容量瓶中，用水多次洗涤试管，一并收入容量瓶，加水至刻度，摇匀待用。置沸水浴中lOmin，冷却后在620nm波长处测量光吸收值,空白管
7、调零点。1.9小鼠脑内Glu和GABA含量的柱前衍生梯度洗脱反相HPLC测定脑组织加蒸馏水后超声匀浆加入高氯酸,25000r/min离心15min,4°C取上清液，滴加KHC03调置pH=9.8o加入丹酰氯/丙酮，加热反应40min后，滴加HCI终止反应,30000r/min离心lOmin,取上清液进行HPLC测定。1.10数据处理使用统计软件SPSS对实验数据进行统计分析。2结果2.1东方红豆对小鼠游泳时间、爬杆时间、血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影响实验组与对照组相比，高剂量组游泳时间
