龟鹿益髓胶囊对实验性脑脊髓炎发病情况、t淋巴细胞增殖及细胞因子的影响

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1、龟鹿益髓胶囊对实验性脑脊髓炎发病情况、T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响张志慧陈金亮王殿华【摘要】　　目的观察中药龟鹿益髓胶囊对实验性脑脊髓炎的发病情况、脾T淋巴细胞增殖、血中IL2，IL4，IL6，TNFα的影响。方法该实验采用豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂制成的抗原-佐剂乳化液诱导大鼠EAE动物模型，应用龟鹿益髓胶囊作为治疗药物，以泼尼松作为对照药物，观察脑脊髓炎大鼠发病情况，T淋巴细胞增殖及血清中IL2，IL4，IL6，TNFα的水平。结果龟鹿益髓胶囊能明显抑制EAE发病，减轻其病情，同时对MBP诱导的脾T淋巴细胞增殖，血清IL2，I

2、L6，TNFα活性有明显抑制作用，对ConA诱导脾淋巴增殖，IL-4具有增强作用。结论龟鹿益髓胶囊对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有增强作用，而对MBP诱导的T淋巴细胞增殖具有抑制作用。而泼尼松片对两者诱导T淋巴细胞增殖均有抑制作用。大剂量龟鹿益髓胶囊能抑制IL2，IL6，增强IL4的活性，调节免疫功能，从而抑制EAE发病，提示中药龟鹿益髓胶囊通过调节体内紊乱的免疫功能起到治疗作用。【关键词】实验性脑脊髓炎龟鹿益髓胶囊发病情况T淋巴细胞增殖细胞因子　　多发性硬化(multiplesclerosis，MS)是一种T细胞介导的中枢神经系统脱髓鞘疾

3、病，好发于20～40岁的青壮年女性，致残率高，复发率高，给社会、家庭和个人造成了极大的经济和心理负担。现代研究已经发现本病患者脑内广泛存在髓鞘特异性T淋巴细胞，活化的T淋巴细胞通过血脑屏障（BBB），可分泌多种细胞因子，这些细胞因子再通过免疫机制或直接作用导致髓鞘的脱失，而引起脑和脊髓的炎症反应和脱髓鞘变化〔1〕。本实验中通过中药龟鹿益髓胶囊对MS模型(ExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis,EAE)-脑脊髓炎发病情况、脾T淋巴细胞增殖、血清中IL2，IL4，IL6，TNFα的影响，来探讨本药治疗MS的

4、药效学研究。　　1材料与方法　　1.1动物健康a生产。IL-2，IL-4，IL-6，TNF-α放免试剂盒购于北京301医院放免研究所；龟鹿益髓胶囊，由石家庄以岭药业股份有限公司提供；泼尼松片（阳性药），由浙江仙琚制药股份有限公司提供。　　1.3实验分组及给药将70只健康的雌性g/ml。空白组乙醚麻醉后4个足垫及背部共5个部位，每个部位0.1ml，共0.5ml；模型组乙醚麻醉后在同样部位注射抗原乳剂。实验日计为0d，以后每天称重并观察病情变化，时间为1个月。　　1.4观察方法　　1.4.1观察发病情况观察各组动物的发病潜伏期、体重损失情况、发病率、死亡

5、率、症状体征等，症状体征　　3结论　　ConA刺激T细胞增殖能力代表机体正常的免疫功能，实验中ConA刺激的EAE模型大鼠多克隆T细胞增殖能力显著低于正常组，而MBP诱导的特异性T细胞的增殖却显著高于正常组，这说明EAE模型大鼠整体免疫功能，即正常的免疫功能是低下的，而针对MBP的特异性T细胞增殖是异常增高的。实验结果发现龟鹿益髓胶囊对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有增强作用，而对MBP诱导的T淋巴细胞增殖具有抑制作用。而泼尼松片对两者诱导T淋巴细胞增殖均有抑制作用，表明中药龟鹿益髓胶囊和西药泼尼松片对本病治疗的部分作用机制是不同的。　　近年来许多研究

6、表明，细胞因子参与神经系统的免疫调节，与MS发病密切相关。IL-2，IL-4，IL-6，TNF-α在机体免疫反应中起重要作用，IL-2，IL-6，TNF-α是MS正调节因子，IL-4是负调节因子，它们之间具有密切联系，均参与MS免疫反应，影响MS的病情变化。本实验观察发现，EAE模型大鼠体内细胞因子的分泌处于一种紊乱状态，IL-2，TNF-α，IL-6异常增高，IL-4异常降低，出现了免疫偏离现象。可见EAE的发生正是Th细胞平衡的破坏，通过调节分化后细胞因子水平，平衡Th细胞活化，校正有害的免疫偏离，是治疗的一个途径。通过治疗后发现龟鹿益髓胶囊可减

7、轻EAE发病动物的体重损失，抑制血清IL-6，TNF-a，IL-2的活性；大剂量龟鹿益髓胶囊可明显延长EAE动物的发病潜伏期，减轻动物的体重损失和临床症状，明显抑制EAE豚鼠血清IL-6，TNF-α，IL-2的活性，增强IL-4的活性，从而对紊乱的免疫功能有调节作用，减轻EAE的发病和病情的严重程度。表2龟鹿益髓胶囊对EAE大鼠T淋巴细胞增殖的影响（略）表3龟鹿益髓胶囊对EAE大鼠血清中IL-4，IL-2，TNF-α，IL-6的影响(略)　　MS临床多见肢体无力，行走不稳，甚者瘫痪。根据其临床症状，属祖国医学的“痿证”范畴，并从肾、督脉和络脉论治，认

8、为本病是肾精亏损，络脉瘀滞所致，针对其发病病机我们制定了填精益髓，充督活络治疗原则并研制成功中药复方-龟鹿益