干预ox40-ox40l轴对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响

干预ox40-ox40l轴对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响

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1、江苏大学硕士学位论文干预OX40--OX40L轴对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响姓名:苏红玲申请学位级别:硕士专业:内科学指导教师:严金川20120609江苏大学硕士学位论文。摘要目的:本研究观察(1)OX40.OX40L相互作用对C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖、细胞培养上清中1I..-2、IL-4、INF-y细胞因子含量及淋巴细胞中活化T细胞核因子C1(NFATcl)表达的影响,(2)用环孢素A(CSA)阻断NFATcl后观察0)(40.OX40L对脾淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IL-2、IL4、INF-

2、T细胞因子表达的影响。探讨OX40.OX40L相互作用是否通过NFATcl促进小鼠脾淋巴细胞活化。方法:取C57BL/6小鼠脾淋巴细胞,以不同浓度刺激型OX40抗体上调OX40.OX40L相互作用,另以不同浓度抑制型OX40L抗体下调0)(40.OX40L相互作用,不同时间点收获细胞,应用MTr法检测小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、IL4、INF吖细胞因子含量;以实时荧光定量PCR检测细胞培养上清中lNF吖在mRNA水平的表达;流式细胞技术检测淋巴细胞中NFATcl蛋白表达水平。结果:(

3、1)anti.OX40特异性刺激OX40.OX40L轴后,小鼠脾淋巴细胞增殖增强,分泌IL-2和INF吖含量明显增加,IL广4含量无明显变化,淋巴细胞中NFATcl蛋白表达明显上调,anti.OX40(20I.tg/m1)时刺激作用最强,刺激时间48h最佳。(2)anti.OX40L特异性阻断OX40.OX40L轴后,淋巴细胞增殖、分泌细胞因子IL-2和INF.丫含量及淋巴细胞中NFATcl蛋白表达明显受到抑制,anti.OX40L(1001ag/m1)时抑制作用最强,抑制时间48h最佳。干预OX40.OX40L轴

4、对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响(3)用CSA阻断NFATcl后,OX40.OX40L刺激脾淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IL-2、INF吖细胞因子的表达明显受到抑制。结论:OX40.OX40L相互作用通过NFATcl促进小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的表达。关键词:OX40,OX40配体,活化T细胞核因子C1,细胞因子ⅡABSTRACTObjectiveTheaimofthisstudywasfirstToinvestigatetheeffectofOX40/OX40Linteractiononthesplee

5、nlymphocyteproliferation,thecontentofcytokineIL-2,IL广4,INF-丫incellculturesupernatantandthenuclearfactorofactivatedTcellscl(NFATcl)expressionoflymphocytesinC57BL/6mice;secondtoobserveOX40/OX40LinteractiononthelymphocyteproliferationandcytokinesecretioninC57BL/6

6、micespleenlymphocyteafterNFATclwasblockedbycyclosporineA(CSA).LasttoinvestigatetheOX40.OX40LinteractionwhetherpromotespleenlymphocytesactivationthroughNFATcI.MethodsTaketheC57BL/6micespleenlymphocytes,tostimulate/inhibitOX40.OX40Linteractionwithdifferentconcen

7、trationsofOX40antibodyandOX40Lantibodyandharvestcellsatdifferenttimepoints.TheproliferationofspleenlymphocyteswasanalyzedbyMTrmethod;thelevelofIL广4,IL-2andINF—Yincellculturesupernatantweremeasuredbyenzyme.1inkedimmunosorbentassary(ELISA);TheexpressionofI阿吖mRNA

8、wasmeasuredbyRealTimePCR;TheexpressionlevelsofNFATclproteininlymphocytesofC57BL/6micewas.measuredbyflowcytometry·Results(1)AfterstimulatingOX40-OX40Lsignalpathwaywithanti-OX40,thel

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