干预ox40-ox40l轴对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响

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1、江苏大学硕士学位论文干预OX40--OX40L轴对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响姓名：苏红玲申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：严金川20120609江苏大学硕士学位论文。摘要目的：本研究观察(1)OX40．OX40L相互作用对C57BL／6小鼠脾淋巴细胞增殖、细胞培养上清中1I．．-2、IL-4、INF-y细胞因子含量及淋巴细胞中活化T细胞核因子C1(NFATcl)表达的影响，(2)用环孢素A(CSA)阻断NFATcl后观察0)(40．OX40L对脾淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IL-2、IL4、INF-

2、T细胞因子表达的影响。探讨OX40．OX40L相互作用是否通过NFATcl促进小鼠脾淋巴细胞活化。方法：取C57BL／6小鼠脾淋巴细胞，以不同浓度刺激型OX40抗体上调OX40．OX40L相互作用，另以不同浓度抑制型OX40L抗体下调0)(40．OX40L相互作用，不同时间点收获细胞，应用MTr法检测小鼠脾淋巴细胞增殖；ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、IL4、INF吖细胞因子含量；以实时荧光定量PCR检测细胞培养上清中lNF吖在mRNA水平的表达；流式细胞技术检测淋巴细胞中NFATcl蛋白表达水平。结果：(

3、1)anti．OX40特异性刺激OX40．OX40L轴后，小鼠脾淋巴细胞增殖增强，分泌IL-2和INF吖含量明显增加，IL广4含量无明显变化，淋巴细胞中NFATcl蛋白表达明显上调，anti．OX40(20I．tg／m1)时刺激作用最强，刺激时间48h最佳。(2)anti．OX40L特异性阻断OX40．OX40L轴后，淋巴细胞增殖、分泌细胞因子IL-2和INF．丫含量及淋巴细胞中NFATcl蛋白表达明显受到抑制，anti．OX40L(1001ag／m1)时抑制作用最强，抑制时间48h最佳。干预OX40．OX40L轴

4、对小鼠淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响(3)用CSA阻断NFATcl后，OX40．OX40L刺激脾淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IL-2、INF吖细胞因子的表达明显受到抑制。结论：OX40．OX40L相互作用通过NFATcl促进小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的表达。关键词：OX40，OX40配体，活化T细胞核因子C1，细胞因子ⅡABSTRACTObjectiveTheaimofthisstudywasfirstToinvestigatetheeffectofOX40／OX40Linteractiononthesplee

5、nlymphocyteproliferation，thecontentofcytokineIL-2，IL广4，INF-丫incellculturesupernatantandthenuclearfactorofactivatedTcellscl(NFATcl)expressionoflymphocytesinC57BL／6mice；secondtoobserveOX40／OX40LinteractiononthelymphocyteproliferationandcytokinesecretioninC57BL／6

6、micespleenlymphocyteafterNFATclwasblockedbycyclosporineA(CSA)．LasttoinvestigatetheOX40．OX40LinteractionwhetherpromotespleenlymphocytesactivationthroughNFATcI．MethodsTaketheC57BL／6micespleenlymphocytes，tostimulate／inhibitOX40．OX40Linteractionwithdifferentconcen

7、trationsofOX40antibodyandOX40Lantibodyandharvestcellsatdifferenttimepoints．TheproliferationofspleenlymphocyteswasanalyzedbyMTrmethod；thelevelofIL广4，IL-2andINF—Yincellculturesupernatantweremeasuredbyenzyme．1inkedimmunosorbentassary(ELISA)；TheexpressionofI阿吖mRNA

8、wasmeasuredbyRealTimePCR；TheexpressionlevelsofNFATclproteininlymphocytesofC57BL／6micewas．measuredbyflowcytometry·Results(1)AfterstimulatingOX40-OX40Lsignalpathwaywithanti-OX40，thel