人参不同制品对小鼠淋巴细胞增殖免疫功能的影响

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1、人参不同制品对小鼠淋巴细胞增殖免疫功能的影响作者：张瑛，孟建国，王成，申圣丹，王盛民【摘要】目的通过免疫调节功能探讨膨化人参与人参的差异。方法通过测定小鼠脾淋巴细胞的增殖反应，小鼠淋巴细胞释放IL-1量的影响，探讨人参不同制品的免疫调节作用及其优劣。结果膨化人参及人参能促进免疫功能低下小鼠由ConA或LPS诱导的脾淋巴细胞增殖反应，提高小鼠血清IL-1的含量;膨化人参较人参有优势，但是二者同剂量几无显著性差异。结论膨化人参与人参均有增强机体免疫功能的作用。【关键词】人参;淋巴细胞转化;膨化　人参能大补元气，补脾益肺、生

2、津、安神，具有广泛的药理作用，其中增强机体免疫机能是其扶正的主要药理基础之一。人参经膨化后，水煎出膏率提高，从理论上能提高药物的生物利用度，增强药理活性。本研究采用免疫学的实验方法研究了膨化人参与人参对小鼠淋巴细胞增殖的影响，以探讨膨化人参与人参的差异。　　1材料与仪器　　1.1动物健康ICR小鼠，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证编号：医动字第08-004号。　　1.2药品与试剂人参，购自西安市万寿路药材市场，经王盛民鉴定符合《中国药典》要求;膨化人参：人参由谷物膨化机膨化而成。实验中人参、膨化人

3、参均采用煎煮法1.5h2次煎煮，制成1g/ml悬液，置冰箱备用。三健牌注射用环磷酰胺(上海华联制药有限公司，生产批号：021006);盐酸左旋咪片(山东莒南制药厂，生产批号:030105)。　　1.3仪器756MC型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器厂产品);Model3350酶标仪(Bio-Rad公司);K-21N型自动血细胞计数仪(希思美康)。　　2方法[1～3]　　2.1对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响取ICR小鼠84只，♀♂各半，分为7组，每组12只，即对照组、模型组、左旋咪唑组(15mg·kg-1)、膨化人参

4、组(2，5g生药·kg-1)和人参组(2，5g生药·kg-1)。灌胃给药，连续10d后，在继续灌胃的同时，除对照组外，各组小鼠腹腔注射环磷酰胺70mg·kg-1连续3d，1次/d，末次给药后1h，将小鼠脱臼处死，置体积分数为0.75的酒精浸泡5min，在无菌条件下取出脾脏，去除被膜，用Hank's液洗两次，剪碎，把组织碎块放入微型玻璃匀浆器内，反复研磨，制成脾细胞悬液，用200目网过滤脾细胞，然后进行细胞计数，配成5×10-9·L-1待用。按Mosmann法进行，将调整好的细胞悬液加入96孔细胞培养板中，每孔200μl

5、，然后加入终浓度10mg·L-1ConA或20mg·L-1LPS，置37℃5%CO2温箱培养66h，取出培养板，每孔加5g·L-1MTT20μl继续培养46h。取出反应板，3000r·min-1离心10min，吸去上清液，每孔加入酸化异丙醇150μl于振荡器振荡30s，充分混匀，10min后在酶标仪570nm处或630nm读取数值。　　2.2对小鼠淋巴细胞分泌细胞因子白介素IL-2的影响取小鼠，分组、给药剂量造模方法同“2.1”项，连续灌胃14d。末次给药后1h，实验小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5min，无菌取脾，

6、用RPMI-1640培养液洗涤，在200目钢丝网上剪碎，用灭菌玻璃注射芯轻磨、过滤，分别制成脾细胞悬液，0.83%Tris-NH4Cl破坏红细胞，冰浴静置10min，2000r·min-1离心10min，用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次，经台朌蓝染色测定细胞活率大于95%，再以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液制成1×107/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA5×10-6g/ml，培养于24孔细胞培养板，在5%CO2孵箱中37℃温育24h;离心收集上清液，-20℃保存，即为IL-2待测样品。BalB/C小鼠颈

7、椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5min，无菌取脾，用RPMI-1640培养液洗涤，在200目钢丝网上剪碎，用灭菌玻璃注射芯轻磨、过滤，制成脾细胞悬液，0.83%Tris-NH4Cl破坏红细胞，冰浴静置10min，2000r/min离心10min，用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次，经台酚蓝染色测定细胞活率大于95%。再以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液制成5×106/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA2.5×10-6g/ml，置25ml的细胞培养瓶中温育96h。细胞用10×10-3g/ml的α-甲基甘露糖苷的Ha

8、nk's液洗两次，含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液洗一次，调节细胞浓度为1×106/ml，作为测定IL-2的反应靶细胞。取-20℃保存的各组IL-2上清液，均作1/4，1/8，和1/32稀释，分别用ConA活化的小鼠脾淋巴细胞测定其IL-2水平，即在96孔细胞培养板中，每孔加反应细胞0.1ml(1×105个)和等量的稀释