核转录因子klf6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用

《核转录因子klf6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、核转录因子KLF6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用【摘要】目的研究大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中，肝脏核转录因子KLF6及相关基因表达变化及其作用。方法建立高脂饮食脂肪性肝纤维化模型，用RTPCR与免疫组织化学法观察肝组织中KLF6、TGFβ1、αSMA表达变化，放射免疫法检测血清肝纤维化指标HA、LN、CⅣ。结果模型组大鼠高脂喂养8周呈现单纯性脂肪变，肝脏KLF6、TGFβ1、αSMA的mRNA表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。12周时随着脂肪变的加重，KLF6mRNA表达上调(0.62±0.10,

2、P<0.01)，于16周达高峰(1.01±0.07，P<0.01)，24周略有回落(0.81±0.08，P<0.01)；而TGFβ1和αSMA的mRNA表达于16周时开始增高(0.62±0.19、0.77±0.12，P<0.01)，24周达高峰(0.91±0.07、1.08±0.19，P<0.01)。相关分析发现，KLF6与TGFβ1、αSMA表达以及肝纤维化分级评分之间呈显著正相关(r=0.848、0.859、0.706，P<0.01)。结论高脂饮食引起KLF6表达增强，最初可能是一种适应性反应，随着

3、其表达进一步增强，可引起TGFβ1和αSMA表达持续上调，从而促进脂肪性肝纤维化的发生、发展。【关键词】KLF6转化生长因子β1平滑肌肌动蛋白非酒精性脂肪性肝病肝纤维化【Abstract】ObjectiveTostudytheexpressionandsignificanceofKruppellikefactor6(KLF6)andrelativegenesduringthecourseofdevelopmentofnonalcoholicfattyliverfibrosisinrats.MethodsAratfattyliverfibro

4、sismodelinggromunohistochemistryandRTPCR.Inthemeantime,HA,LNandCIVeansofradioimmunity.ResultsAtthe8thRNAparedRNARNAbegantoupregulateto(0.62±0.19,0.77±0.12)atthe16thotedevelopmentoffattyfibrosis.【Keyinggrooothmucleactin;Nonalcoholicfattyliverdisease;Liverfibrosis肝纤维化是肝脏对各种慢

5、性损伤疾病的一种修复应答反应，具有可逆性。细胞因子网络调控的肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)活化是肝纤维化形成的主要发病机制。体内外实验证明在HSC的活化过程中相关细胞/生长因子的转录均受相应的核转录因子的调控。已知在肝纤维化发生过程中转化生长因子β1(transforminggroa公司；KLF6兔多克隆抗体购自Satan公司；平滑肌肌动蛋白(αsmoothmucleactin,αSMA)小鼠单克隆抗体购自武汉博士德。1.2方法1.2.1动物模型［2］雄性asson染色观察有无肝纤维化并分级，依据纤维化的范围和程

6、度将脂肪性肝纤维化分为5级，S0：无纤维化；S1：腺泡带局灶性或广泛的窦周/细胞周纤维化；S2：纤维化扩展到门管区星芒状纤维化；S3：纤维化扩展到门管区周围，局灶性或广泛的的桥接纤维化；S4：肝硬化。肝纤维化分级评分标准：S00分；S11分；S22分；S33分；S44分。1.2.4免疫组化肝组织石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，PBS洗3次，pH8.0EDTA微波修复，滴加不同稀释浓度的一抗(KLF61∶200，αSMA1∶50)后4℃过夜，次日滴加二抗，37℃孵育1h后DAB显色，经苏木素复染，稀盐酸酒精分色后封片观察，

7、每次实验均设阴性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗。每例均随机观察5个高倍视野，读取阳性细胞数。王晓敏，等.核转录因子KLF6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用1.2.5KLF6、TGFβ1、αSMAmRNA检测肝组织总RNA的提取，按Tripure试剂盒说明进行操作，最后加入DEPC去离子水20μl重新溶解RAN，待用。RNA样品的纯度根据260nm及280nm吸光值的比值(A260/280)来计算，比值在1.6～2.0之间。RNA样品的电泳鉴定：取用1%甲醛变性琼脂糖凝胶，10μgRAN样品电泳，紫外观察，如28S、18S、5SrRAN带清晰

8、可见，带与带之间无明显脱尾则表明RAN无明显降解，可用于RTPCR分析。1.2.6引物设计利用引物设计软件设计各引物。KLF6上游引物