核转录因子klf6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中

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1、核转录因子KLF6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中【摘要】目的研究大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中，肝脏核转录因子KLF6及相关基因表达变化及其作用。方法建立高脂饮食脂肪性肝纤维化模型，用RTPCR与免疫组织化学法观察肝组织中KLF6、TGFβ1、αSMA表达变化，放射免疫法检测血清肝纤维化指标HA、LN、CⅣ。结果模型组大鼠高脂喂养8周呈现单纯性脂肪变，肝脏KLF6、TGFβ1、αSMA的mRNA表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。12周时随着脂肪变的加重，KLF6mRNA表达上调(

2、0.62±0.10,P<0.01)，于16周达高峰(1.01±0.07，P<0.01)，24周略有回落(0.81±0.08，P<0.01)；而TGFβ1和αSMA的mRNA表达于16周时开始增高(0.62±0.19、0.77±0.12，P<0.01)，24周达高峰(0.91±0.07、1.08±0.19，P<0.01)。相关分析发现，KLF6与TGFβ1、αSMA表达以及肝纤维化分级评分之间呈显著正相关(r=0.848、0.859、0.706，P<0.01)。结论高脂饮食引起K

3、LF6表达增强，最初可能是一种适应性反应，随着其表达进一步增强，可引起TGFβ1和αSMA表达持续上调，从而促进脂肪性肝纤维化的发生、发展。【关键词】KLF6转化生长因子β1平滑肌肌动蛋白非酒精性脂肪性肝病肝纤维化【Abstract】ObjectiveTostudytheexpressionandsignificanceofKruppellikefactor6(KLF6)andrelativegenesduringthecourseofdevelopmentofnonalcoholicfattyliverfibro

4、sisinrats.MethodsAratfattyliverfibrosismodelinggromunohistochemistryandRTPCR.Inthemeantime,HA,LNandCIVeansofradioimmunity.ResultsAtthe8thRNAparedRNARNAbegantoupregulateto(0.62±0.19,0.77±0.12)atthe16thotedevelopmentoffattyfibrosis.【Keyinggrooothmucleactin;Nonal

5、coholicfattyliverdisease;Liverfibrosis肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤疾病的一种修复应答反应，具有可逆性。细胞因子网络调控的肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)活化是肝纤维化形成的主要发病机制。体内外实验证明在HSC的活化过程中相关细胞/生长因子的转录均受相应的核转录因子的调控。已知在肝纤维化发生过程中转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是最主要的促纤维生成因子，可使肝星状细胞激活并分泌大量胶原纤维。目前有关TGF

6、β1及其下游信号通路的研究较多，而对其上游调控基因在纤维化形成中的表达研究较少。研究发现核转录因子KLF6(kruppellikefactor6)是一种损伤后修复基因，对TGFβ1及其受体具有反式激活作用［1］，很可能是调节HSC激活过程中TGFβ1自分泌环的重要因子。因此本实验通过观察TGFβ1及其上游调节基因KLF6在脂肪性肝纤维化形成中的动态变化，初步探讨KLF6在脂肪性肝纤维化形成中的作用和机制。1材料与方法1.1材料胆固醇和胆盐购自重庆市医药公司生化试剂公司；透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型

7、胶原(CⅣ)放射免疫试剂盒购自北京北方生物技术研究所；Tripure购自上海罗氏公司；RTPCR试剂盒购自大连宝生物公司；PCRMarker购自Takara公司；焦磷酸二乙酯(DEPC)购自Sigma公司；KLF6兔多克隆抗体购自Satan公司；平滑肌肌动蛋白(αsmoothmucleactin,αSMA)小鼠单克隆抗体购自武汉博士德。1.2方法1.2.1动物模型［2］雄性asson染色观察有无肝纤维化并分级，依据纤维化的范围和程度将脂肪性肝纤维化分为5级，S0：无纤维化；S1：腺泡带局灶性或广泛的窦周/细胞周纤维

8、化；S2：纤维化扩展到门管区星芒状纤维化；S3：纤维化扩展到门管区周围，局灶性或广泛的的桥接纤维化；S4：肝硬化。肝纤维化分级评分标准：S00分；S11分；S22分；S33分；S44分。1.2.4免疫组化肝组织石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，PBS洗3次，pH8.0EDTA微波修复，滴加不同稀