复方二精灵多糖抗脑缺血缺氧损伤的分子机理

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1、复方二精灵多糖抗脑缺血缺氧损伤的分子机理作者：尹世金，刘向明，吴群绒，梅之南【关键词】复方二精灵　　摘要：目的：研究复方二精灵多糖抗脑缺血损伤的分子机理。方法：采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的小鼠海马CA1区神经元电压门控性钠电流，观察复方二精灵多糖对钠电流的影响，拟从离子通道水平揭示复方二精灵的抗缺血缺氧脑损伤作用。结果：0.1%复方二精灵多糖显著抑制海马神经元电压门控性钠通道电流锋值，使钠电流的半激活电压向去极化方向偏移，不影响钠电流的稳态失活及复活曲线。结论：复方二精灵多糖对海马神经元电压门控性钠电流的抑制作用可能为复方二精灵抗缺血缺氧脑损伤的重要机理。　　关键词：复方二精灵；海马神经

2、元；电压门控性钠通道　　TheMolecularMechanismofpoundErjinglingPolysaccharideNeuroprotectionEffectonHypoxiaandIschemiaDamage　　Abstract:Usingptechnologyonthemembraneoffreshlyisolatedhippocampalneurons,theeffectsofpoundErjinglingpolysacharideonvoltagegatedsodiumcurrentsolecularmechanismofneuroprotectioninhypoxiaan

3、dischemiadamage.Theexperimentaldatademonstratedthatpeaksodiumcurrentsofhippocampalneuronsdecreasedsignificantlyafterapplicationof0.1%poundErjinglingpolysaccharide(from100%to60.96±12.13%,n=16，P<0.05).Thehalf-maximumactivationvoltageofINashiftedfrom29.98±4.30mVto15.85±2.9mVafteradministering0.1%pou

4、ndErjingling(n=6,P<0.05).TheinhibitioneffectsofpoundErjinglingpolysaccharideonsodiumcurrentsinhippocampalneuronscouldpartlyexplaintheneuroprotectionofpoundErjinglinginhypoxiaandischemiadamage.　　Keychannel；Hippocampalneuron　　复方二精灵是由枸杞子（FructusLycii）和黄精（RhizomeofKingSolomOseal）组成，最早收载于《圣济总录》，具有“助气固

5、精，补填丹田，活血驻颜，长生不老”之功效。现代研究证实复方二精灵可拮抗谷氨酸对离体培养神经细胞的兴奋性毒作用，明显降低缺血缺氧小鼠脑组织乳酸含量，使海马细胞变性及肿胀程度减轻，从而改善拟痴呆小鼠的学习记忆能力［1］。复方二精灵成分复杂，种种迹象表明复方二精灵中的黄精多糖［2］和枸杞多糖［3］是其抗缺血缺氧脑损伤的重要活性部位，但因缺乏分子水平的合理解释，制约了复方二精灵的临床使用。由于缺血缺氧过程中神经细胞变性损害与神经细胞膜上电压门控性钠通道介导的钠离子内流增强有关［4］，多种药物正是通过阻滞神经细胞膜上电压门控性钠通道而发挥脑保护作用［5，6］。在所有脑神经元中，海马神经元对缺血缺氧最为敏

6、感［7］，海马组织也是学习记忆功能的关键脑区［8］，能否有效减轻海马神经元损伤成为缺血缺氧过程中脑保护的关键。鉴于此，本研究主要观察复方二精灵多糖对急性分离的小鼠海马神经元电压门控性钠通道的影响作用，拟从分子水平揭示其在缺血缺氧过程中的脑保护作用。　　1材料与方法　　1.1复方二精灵多糖的制备取黄精和枸杞各50g，混匀。依次用5倍体积石油醚-丙酮（V/V1∶1）回流脱脂，5倍体积80％乙醇(V/V)脱单糖、低聚糖等杂质，然后用1000ml热水提取3次，水提取液合并，60℃减压浓缩至1.5倍体积，浓缩液以95％乙醇沉淀，至乙醇浓度为80％，沉淀2次，沉淀物依次用95％乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤脱水

7、，60℃真空干燥得粗多糖7.30g。复方二精灵多糖含量用硫酸-苯酚法490nm处检测，其含量为80.8％。　　1.2海马神经元的急性分离一月龄昆明种小鼠（15～20g，武汉大学实验动物中心提供）颈椎脱臼处死，断头取脑于4℃的D-hanks液中冷冻1min后移入氧饱和的ACSF液中分离双侧海马。在32℃的恒温水浴摇床中孵育海马40min后加入0.2ｍｇ/ml链酶蛋白酶E(proteaseⅩⅣ,Sig