不同地区铜绿假单胞菌第一类整合子和整合子相关基因盒的分布论文

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1、不同地区铜绿假单胞菌第一类整合子和整合子相关基因盒的分布论文杨维青石磊尹晓琳李心晖谢轶程曦曾蔚殷长甫贾文祥【关键词】铜绿假单胞菌；,,第一类整合子；,,整合子相关基因盒摘要：目的对石家庄、昆明两地分离的铜绿假单胞菌临床菌株进行第一类整合子的分布及整合子相关基因盒携带率的比较分析，探讨第一类整合子在两地菌株分布的差别。方法采用PCR方法筛选检测64株石家庄、昆明两地临床分离的铜绿假单胞菌第一类整合子和及其所携带的整合子相关基因盒。结果64株铜绿假单胞菌临床菌中共有43株为第一类整合子阳性菌(阳性率672

2、%)；其中石家庄菌株和昆明菌株阳性率分别为714%和643%，两地铜绿假单胞菌第一类整合子阳性率无显著性差异。第一类整合子阳性铜绿假单胞菌中，石家庄菌株和昆明菌株携带一类整合子相关基因盒的阳性率分别为800%和38%，两地第一类整合子阳性菌中整合子相关基因盒的携带率具有显著性差异(P001)；两地菌株携带的基因盒大小不同。结论第一类整合子在铜绿假单胞菌临床菌株中广泛分布，环境的选择压力影响细菌整合子相关基因盒的分布。关键词：铜绿假单胞菌；第一类整合子；整合子相关基因盒Distributionandid

3、entificationofclass1integronsandintegratedgenecassettesABSTRACTObjectiveThedistributionandcharacterizationoftheclass1integrons(int1)andintegratedgenecassettesamongPseudonmonasaeruginosastrainsfromdifferentgeographicregionsShijiazhuangandKunminghospitals

4、,China.Thepresenceandgeiccontentofint1andintegratedgenecassettesinedbyPCRmethod.ResultsTheincidenceofint1inthe64clinicalisolatesofP.aeruginosaShijiazhuangandKunmingShijiazhuangandKunming.ConclusionResultsrevealedthatintegronstructuresonasaeruginosa;Inte

5、gron;Integratedgenecassette收稿日期：20050706修回日期：20050917随着抗生素在临床抗感染治疗上的广泛使用，细菌耐药性问题日益严重，细菌间基因的水平转移是细菌多重耐药性形成和广泛传播的重要原因。整合子(integron)系统具有捕获和表达外来耐药基因盒的能力.freelentofVeterinaryMicrobiology，Denmark的AnitaForslund博士惠赠；第一类整合子阴性对照菌株为E.coliC600，由日本大阪府立大学国际防疫学研究室山崎伸二

6、教授惠赠。1.2铜绿假单胞菌第一类整合子的检测1.2.1DNA模板的制备将临床分离的铜绿假单胞菌、整合子阳性及阴性对照菌株分别接种于LB培养基中过夜培养；取菌液50μl，悬浮在450μl双蒸水中，在沸水中煮10min后，立即在冰中冷却。稍后在10000r/min条件下离心，上清液为粗提DNA，-80℃保存。1.2.2第一类整合子整合酶基因(intI1)扩增设计引物intI1U(5′GTTCGGTCAAGGTTCTG3′)和intI1D(5′GCCAACTTTCAGCACATG3′)扩增intI1。PC

7、R体系总体积为50μl，其中包括10×PCR缓冲液5μl，模板DNA2μl，dNTP混合物(each25mmol/L)4μl，上、下游引物(10pmol)各15μl，rTaqDNA聚合酶025μl(5U/μl，TaKaRa生物工程公司)，无菌双蒸水3675μl。PCR条件：94℃变性5min；94℃05min，52℃1min，72℃延伸2min，30个循环；最后72℃延伸7min。将PCR产物在琼脂糖凝胶中电泳，凝胶经溴化乙啶染色，在凝胶成像系统(BIORADGelDecEQ)下照像。1.3第一类整合

8、子相关基因盒扩增对以上筛选的第一类整合子阳性菌进第一类整合子相关基因盒扩增。设计引物inF(5′GGCATCCAAGCAGCAAGC3′)和inB(5′AAGCAGACTTGACCTGAT3′)扩增第一类整合子相关基因盒。PCR反应体系为10×缓冲液5μl，dNTP(25mmol/Leach)4ul，inF和inB各3μl，rTaqDNA聚合酶(5U/μl)025μl，模板DNA2μl，加无菌双蒸水至50μl。PCR条件：94℃变性5min；94℃30s