不同地区铜绿假单胞菌

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1、不同地区铜绿假单胞菌杨维青石磊尹晓琳李心晖谢轶程曦曾蔚殷长甫贾文祥【关键词】铜绿假单胞菌；,,第一类整合子；,,整合子相关基因盒摘要：目的对石家庄、昆明两地分离的铜绿假单胞菌临床菌株进行第一类整合子的分布及整合子相关基因盒携带率的比较分析，探讨第一类整合子在两地菌株分布的差别。方法采用PCR方法筛选检测64株石家庄、昆明两地临床分离的铜绿假单胞菌第一类整合子和及其所携带的整合子相关基因盒。结果64株铜绿假单胞菌临床菌中共有43株为第一类整合子阳性菌(阳性率672%)；其中石家庄菌株和昆明菌株阳性率分别为714%和643%，两地铜绿假单胞菌第一类整合

2、子阳性率无显著性差异。第一类整合子阳性铜绿假单胞菌中，石家庄菌株和昆明菌株携带一类整合子相关基因盒的阳性率分别为800%和38%，两地第一类整合子阳性菌中整合子相关基因盒的携带率具有显著性差异(P001)；两地菌株携带的基因盒大小不同。结论第一类整合子在铜绿假单胞菌临床菌株中广泛分布，环境的选择压力影响细菌整合子相关基因盒的分布。　关键词：铜绿假单胞菌；　第一类整合子；　整合子相关基因盒Distributionandidentificationofclass1integronsandintegratedgenecassettesABSTRACTOb

3、jectiveThedistributionandcharacterizationoftheclass1integrons(int1)andintegratedgenecassettesamongPseudonmonasaeruginosastrainsfromdifferentgeographicregionsShijiazhuangandKunminghospitals,China.Thepresenceandgeiccontentofint1andintegratedgenecassettesinedbyPCRmethod.ResultsTh

4、eincidenceofint1inthe64clinicalisolatesofP.aeruginosaShijiazhuangandKunmingShijiazhuangandKunming.ConclusionResultsrevealedthatintegronstructuresonasaeruginosa;Integron;Integratedgenecassette收稿日期：20050706修回日期：20050917随着抗生素在临床抗感染治疗上的广泛使用，细菌耐药性问题日益严重，细菌间基因的水平转移是细菌多重耐药性形成和广泛传播的重要

5、原因。整合子(integron)系统具有捕获和表达外来耐药基因盒的能力，细菌可以通过该系统中的整合酶基因(intI)编码的整合酶(integrase)不断地从周围环境中捕获和积累耐药基因盒，形成巨大的耐药基因多基因座。整合子可存在于质粒、转座子等可移动的基因元件上，在同种或不同种属的细菌之间进行基因的水平转移〔1，2〕。整合子在多重耐药菌的形成及耐药基因的水平播散中起重要作用。研究表明，环境的抗生素选择压力对整合子及耐药基因在细菌中的分布起着重要作用，在革兰阴性细菌中发现的很多抗生素耐药基因都是作为基因盒的一部分而插入在整合子中的〔3，4〕。目前根

6、据整合子中整合酶基因(intI)的不同，将已经发现的整合子分为六类，其中第一类整合子最常见。本研究对石家庄、昆明两地临床分离的耐药性突出的院内感染条件致病菌铜绿假单胞菌进行第一类整合子的筛选及基因盒比较分析。1材料和方法1.1菌株临床分离铜绿假单胞菌69株，分别分离自石家庄(PA1～PA39)和昆明(PA40～PA69)的医院；第一类整合子阳性对照菌株为V.choleraeO1strainSK10，由DepartmentofVeterinaryMicrobiology，Denmark的AnitaForslund博士惠赠；第一类整合子阴性对照菌株为E

7、.coliC600，由日本大阪府立大学国际防疫学研究室山崎伸二教授惠赠。1.2铜绿假单胞菌第一类整合子的检测1.2.1DNA模板的制备将临床分离的铜绿假单胞菌、整合子阳性及阴性对照菌株分别接种于LB培养基中过夜培养；取菌液50μl，悬浮在450μl双蒸水中，在沸水中煮10min后，立即在冰中冷却。稍后在10000r/min条件下离心，上清液为粗提DNA，-80℃保存。1.2.2第一类整合子整合酶基因(intI1)扩增设计引物intI1U(5＇GTTCGGTCAAGGTTCTG3＇)和intI1D(5＇GCCAACTTTCAGCACATG3＇)扩增i

8、ntI1。PCR体系总体积为50μl，其中包括10×PCR缓冲液5μl，模板DNA2μl，dNTP混合物(each25mm